在生物医药行业中,如果我们首次进入一个下游工艺的实验,一眼望去,可以看到各种各样的填料。这些装在瓶子里或者桶里的填料,有的透亮,有的显示出白色。倘若有一款填料,瓦蓝瓦蓝的,与同类显得格外不同,一定会吸引你的目光。这就是今天本文所介绍主角,一款非常独特的亲和填料——蓝胶。
简单说,蓝胶是用Cibacron Blue 3GA染料分子作为亲和配基的一款神奇的亲和层析填料。这个染料分子天然显示出蓝色,由其制备而成的填料也就显得瓦蓝瓦蓝的,这就赋予了这款填料的一个独特外号“蓝胶”。
Cibacron Blue 3GA分子属于蒽醌衍生物,分子结构中有氨基、磺酸基和苯基,以其核苷酸特异性、离子和疏水性捕获蛋白质[1]。
一般来说,蓝胶除了可以特异性地结合白蛋白外,也可以结合干扰素及其他血浆蛋白;另外,它对于多种蛋白酶都有着出色的结合效果,包括脱氢酶、激酶、转移酶,以及大多数含腺苷酸的辅酶,例如NAD+。
博格隆供应Blue Bestarose FF、Blue Bestarose HP、Diamond Blue、Diamond Blue Mustang 4款优异的蓝胶产品,技术参数如下表:
+接触时间:4min
• 样品:人血白蛋白
• 层析柱:EzFast,1 mL
• 流速:0.2mL/min
• 结合液:50mM KH2PO4,pH7.0
• 洗脱液:1.5M NaCl,50 mM KH2PO4,pH7.0
Fig. 1 Blue Bestarose FF结合洗脱图谱
• 样品:人血上清稀释样 120mL
• 层析柱:EzFast Blue FF 5mL
• 流速:1mL/min
• 平衡:20mM NaH2PO4,pH7.0
• 淋洗:20mM NaH2PO4,0.5M NaCl,pH7.0
• 洗脱:20mM NaH2PO4,2M NaCl,pH7.0
Fig. 2 EzFast Blue FF洗脱产物的毛细管电泳分析图谱[2]
Fig. 3 白蛋白纯化数据分析[2]
如Fig. 3所示,洗脱产物纯度达90%,回收率为49.59%,浓度为12.08mg/mL。
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[1] Subramanian S. Dye-ligand affinity chromatography: the interaction of Cibacron Blue F3GA with proteins and enzymes. CRC Crit Rev Biochem. 1984;16(2):169-205
[2] 吕兴凯, 王吟, 任科云, 胡尚杰, 何昆, 陈爱芳, 张帆. 毛细管电泳法分析人血白蛋白纯化工艺的有效性[J]. 中国生物制品学杂志, 2020, 33 (12): 1441-1444.
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