无菌脱纤维羊全血的制法与主要用途及应用研究！

                   无菌脱纤维羊全血的制法与主要用途及应用研究！

一、背景

无菌脱纤维羊全血适应于血琼脂平板等培养基的生产、绵羊红细胞提取、细菌培养、生物医学研究基础等。无菌脱纤维羊全血是对健康绵羊无菌采血，玻璃珠摇床脱纤维而成，天然新鲜血液，颜色鲜红，无任何细菌、真菌、支原体、衣原体，不添加任何防腐剂、抗生素。

血平板适于各类细菌的生长，一般细菌检验标本的分离，都应接种此平板。原料普通琼脂培养基100ml 脱纤维血液5—10ml 。

二、制法

①以无菌操作采取绵羊、牛、马或兔血置于灭菌并盛有玻璃珠的三角瓶内，边加血边不停地摇动玻璃珠直至血纤维分离为止。

②普通琼脂培养基加热溶解后，待冷至约55—60度时，以无菌操作按量加入血液，轻轻摇动均匀，不使产生泡沫，随即分装于灭菌的平皿或试管中，制成血液琼脂平板或血液琼脂斜面。

三、用途

供某些病原菌的分离培养用；观察细菌的溶血现象，作鉴别用；常规移植继代和保存菌种。取营养琼脂（PH7．6），加热使其溶解待冷至45-50℃，以灭菌操作于每100毫升营养琼脂加灭菌脱纤维羊血或兔血5-10毫升,轻轻摇匀，立即倾注于平板或分装试管，制成斜面备用。

四、应用

用于新生儿17α-羟孕酮和总半乳糖测定试剂及妊娠相关蛋白A(PAPP-A)质控品的研制研究：

以脱纤维绵羊全血作为校准品、质控品配制用基质。具体过程是：采用17a-羟孕酮抗原配制校准品,以17a-羟孕酮欧洲标准品为对照,在PE公司17a-羟孕酮试剂盒上进行校准品的标定。

标定后的校准品浓度分别为Ong/ml、1.3ng/ml、3.2ng/ml、7ng/ml、25ng/ml和100ng/ml。通过本底荧光值及剂量-反应曲线范围、相关系数等指标,确定包被板、包被体积等条件；对二抗和一抗进行两两配对比较；选择抗原偶联物进行铕标记并纯化；对不同稀释比例的标记抗原偶联物与不同浓度的二抗进行配对实验等。

新生儿总半乳糖定量测定试剂(荧光分析法)的反应原理是：滤纸干血片中的总半乳糖在半乳糖脱氢酶的催化作用下,与NAD反应,生成半乳糖内酯和NADH。用荧光检测仪在激发波长355nm和发射波长460nm条件下,测定生成物NADH的荧光强度,其荧光强度与总半乳糖的浓度成正比。以脱纤维绵羊全血作为校准品、质控品配制用基质。

采用半乳糖-1-磷酸配制校准品,通过芬兰Labsystem公司新生儿半乳糖检测试剂盒(荧光分析法)进行标定,标定后的校准品浓度依次为：Omg/dl、5mg/dl、10mg/dl、20mg/dl、40mg/dl、60mg/dl。采用本底荧光值及剂量-反应曲线范围、相关系数等指标,选择合适的包被板和主要原材料,选择碱性磷酸酶：半乳糖脱氢酶:NADH混合反应液配比,并对铜试剂的各反应条件进行优化,如硫酸铜溶液的不同稀释比例(1：10000、1：1000、1：100和1：10)、碳酸钠-酒石酸钾钠缓冲液和硫酸铜溶液的不同比例(3：2、1：1、2：1)；对试剂加样体积和反应时间进行研究。

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