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ELISA试剂盒四种检测方法吗？
ELISA试剂盒四种检测方法吗？
1．间接法测定抗体
将抗原吸附于固相载体表面；
加抗体, 形成抗原-抗体复合物；
加酶标抗体；
加底物。 测定底物的降解量＝抗体量。
2．双抗体夹心法测定抗原
将抗原免疫第一种动物获得的抗体吸附于固相表面;
加抗原，形成抗原-抗体复合物;
加抗原免疫第二种动物获得的抗体，形成抗体抗原抗体复合物;
加酶标抗抗体(第二种动物抗体的抗体);
加底物。底物的降解量＝抗原量。
3．直接法测定抗原
将抗原吸附在载体表面；
加酶标抗体，形成抗原-抗体复合物；
加底物。底物的降解量＝抗原量
4．竞争法测定抗原
将抗体吸附在固相载体表面;
(1) 加进酶标抗原；
(2),(3)加进酶标抗原和待测抗原；
加底物。对照孔与样品孔底物降解量的差＝未知抗原量。
操纵步骤
1. 包被抗原：用包被液将抗原作适当稀释, 一般为1～10微克/孔，每孔加200微升，37℃温育1小时后，4℃冰箱放置16～18小时。
2.洗涤：倒尽板孔中液体，加满洗涤液，静放三分钟，反复三次，最后将反应板颠倒在吸水纸上，使孔中洗涤液流尽。
3. 加辣根过氧化物酶羊抗兔IgG, 每孔200微升, 放置37℃ 1小时。
4. 洗涤同2。
5. 加底物：邻苯二胺溶液加200ml，室温暗处10--15分钟。
6. 加终止液：每孔50微升。
7. 加封闭液200微升，37℃放置一小时。
8. 洗涤同2。
9. 加被检血清：用稀释液将被检血清作几种稀释,，每孔200微升。同时作稀释液对照。时。
10. 观察结果：用酶联免疫检测仪记录450nm读数。
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