特色方案｜顶空-GC-MS/MS法测定动物类中药中三甲胺含量

顶空-GC-MS/MS法

测定动物类中药中

三甲胺含量

岛津挥发胺专用柱

SH-Volatil Amin

本文利用岛津三重四极杆气相色谱-质谱联用仪GCMS-TQ8050NX 结合AOC-6000顶空进样以及岛津挥发胺专用柱SH-Volatil Amin，建立了动物类中药中三甲胺的含量测定方法。

在0.1~10μg/mL浓度范围内三甲胺标准曲线线性关系良好, 线性相关系数0.9999。0.1μg/mL标准溶液连续进样6针，峰面积RSD为6.40%。加标回收实验中，加标浓度为50和500mg/kg，平均加标回收率为98.43%和95.64%，对应RSD分别为9.10%和 2.06%。此方法可为动物类中药中三甲胺定量分析提供参考，同时也为动物类中药中腥臭气味来源研究提供思路。

技术特点

1. 创新性样品制备方法，有效消除三甲胺易挥发性对实验结果准确度的影响。

2. 顶空进样结合GC-MS/MS测定，有效抑制了基质化学干扰，保证结果可靠性。

3. 碱改性SH-Volatil Amin有效提升了对三甲胺的惰性，改善峰形及分析稳定性。

三甲胺(Trimethylamine, TMA)是一种带腥臭气味的挥发性有机物，广泛存在于肉类和海鲜等动物源性食品中。其主要来源于动物体内一种蛋白质稳定剂氧化三甲胺(Trimethyamine Oxide, TMAO)的酶促反应，是判断动物源性食物新鲜度的重要指标。

动物类中药源自动物全体、器官、组织或加工制品, 其主要成分为蛋白、多肽类, 在临床应用中疗效确切。但药物腥臭气突出, 例如中医临床常用的地龙、水蛭、美洲大镰、鸡内金等均有明显腥臭气。TMA已被证实是动物类中药腥臭气味的相同关键气味物质之一，患者服药顺应性对药物中三甲胺含量提出了要求，因此需要开发用于动物类中药中三甲胺含量测定的方法。

目前食品中三甲胺含量测定方法较为成熟，并建立了国家标准 GB 5009.179-2016《食品安全国家标准 食品中三甲胺的测定》，但该检测方法容易受到三甲胺易挥发性和高吸附性干扰，影响实验结果稳定性和重现性。

本文利用岛津GC-MS/MS 结合AOC-6000顶空进样以及岛津挥发胺专用柱SH-Volatil Amin，采用独特样品制备方法，建立了动物类中药中三甲胺含量测定方法，并测定了地龙、水蛭和美洲大镰等实际样品中三甲胺含量。该方法灵敏度高，结果可靠，重现性良好，可为动物类中药中三甲胺检测提供参考。

实验部分

结果与讨论

3.1 三甲胺标准溶液谱图

3.2 标准曲线和质量色谱图

使用5%三氯乙酸溶液配制三甲胺盐酸盐标准溶液系列, 浓度分别为0.1、0.5、1.0、2.0、5.0和10.0μg/mL(以三甲胺计)，精密量取各浓度标准溶液2mL分别置于预制好的顶空瓶石蜡层上部，压盖密封后，进 GC-MS/MS分析。以三甲胺浓度为横坐标，三甲胺定量离子对峰面积为纵坐标作标准曲线，标准曲线如图2 所示，线性相关系数如表2所示，三甲胺质量色谱图见图3。

3.3 重复性实验及检出限

取三甲胺盐酸盐标准溶液(以三甲胺计，0.1μg/mL) 2mL置于预制好的顶空瓶石蜡层上部，平行制备样品6份并连续进样，用于考察三甲胺峰面积的重复性，测定结果见表3。以3倍信噪比(峰至峰)计算检出限，三甲胺仪器检出限见表2。

3.4 加标回收率

三甲胺是动物类中药中内源性化合物，同时由于三甲胺的易挥发性，在本实验中，选择三甲胺盐酸盐标准溶液进行加标回收实验。美洲大镰中加标浓度分别为50和500mg/kg，按照前ER每个加标浓度平行制备3份加标样品，考察回收率和RSD。50mg/kg加标水平下，加标回收率分布在88.08%-103.63% 之间，RSD为 9.10%；500 mg/kg加标水平下，加标回收率分布在93.39%-97.08%之间，RSD为2.06%；详细结果见表4。

3.5 实际样品分析结果

选取产地不同的地龙、美洲大镰和水蛭为样品，按前述样品处理流程进行样品制备，并采用上述仪器条件测定，三甲胺检测结果如表5所示。

结论

本方法采用岛津GCMS-TQ8050NX结合AOC-6000 顶空进样以及岛津挥发胺专用柱SH-Volatil Amin，建立了动物类中药中三甲胺含量测定方法，并测定3种动物类中药样品中三甲胺含量。在0.1~10 μg/mL浓度范围内，三甲胺标准曲线线性相关系数0.9999；根据0.1μg/mL三甲胺标样数据，以3倍信噪比(峰至峰)计算仪器检出限为0.63 μg/L；在重复性实验中，浓度为0.1 μg/mL三甲胺标准溶液连续进样6针，峰面积RSD为6.40%；在50mg/kg和500 mg/kg加标水平下，平均加标回收率为98.43%和95.64%。实验结果表明：该方法采用GC-MS/MS多反应监测模式结合独特样品前处理方式，灵敏度高，结果准确，重现性良好，能够有效监测动物类中药中三甲胺含量。

小贴士

含-NH-的化合物容易和色谱柱熔融石英表面-Si-OH形成分子间氢键，容易导致色谱峰拖尾和柱上吸附，影响胺类分析结果准确性和重现性。

方法选择：对于甲胺、二甲胺、三甲胺检测一方面可以考虑离子色谱，另一方面可以考虑气相色谱，分析挥发胺相对更简单快速。

GC柱选择：如使用常规色谱柱，建议增大膜厚以改善对胺类惰性，但吸附问题无法彻底消除，因此更建议碱改性挥发胺专用柱，一方面通过碱改性真实提升对胺类惰性，另一方面高膜厚增加了对挥发胺保留，从而有效分离挥发胺。

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