微生物计数培养基适用性检查的一般要求与操作方法！

                微生物计数培养基适用性检查的一般要求与操作方法！

计数培养基适用性检查

1、一般要求

2、胰酪大豆胨琼脂（TSA）

无菌性检查：取已灭菌TSA注皿，于30-35℃培养3天，应无菌落生长。

试验用菌种：金葡、铜绿、枯草、白念、黑曲

接种方法：

涂布法：分别接种不大于100cfu试验用菌悬液于TSA平板表面；

倾注法：分别接种不大于100cfu试验用菌悬液于无菌平皿中，倾注约15ml该培养基，轻轻摇匀。

适用性检查：枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌于30-35℃培养不超过3天；白色念珠菌、黑曲霉于30-35℃培养不超过5天。

判断标准：与对照培养基比较，菌落平均数比值在0.5-2（50%-200%）范围内，且菌落形态大小一致。

3、胰酪大豆胨液体（TSB）

无菌性检查：取已灭菌的TSB，于30-35℃培养不少于3天，培养基应澄清。

试验用菌种：金葡、铜绿、枯草

接种方法：

涂布法：分别接种试验用菌悬液于该培养基中，接种量不大于100cfu，摇匀，培养。

适用性检查：30-35℃培养不超过3天。

判断标准：金葡、铜绿、枯草接种后，与对照培养基比较，试验菌生长良好。

备注：该培养基同时用于稀释液的制备和控制菌检查时，需考虑同时满足计数和控制菌检查培养基适用性检查控制要求。

4、沙氏葡萄糖琼脂（SDA）

无菌性检查：取已灭菌的SDA注皿,于20-25℃培养5天,应无菌落生长。

试验用菌种：白色念珠菌、黑曲霉

接种方法：

涂布法：分别接种不大于100cfu允试验用菌悬液于该平板表面

倾注法：接种大于1cfu试验用菌悬液于无菌平皿中,倾注约15ml该培养基,轻轻摇匀。

适用性检查：白色念珠菌、黑曲霉于20-25℃培养不大于5天

判断标准：与对照培养基比较菌落平均数比值在0.5-2(50%一200%)范围且菌落大小、形态一致。

备注:如该培养基用于控制菌白色念珠菌的检查时,同时需要满足捌菌项下培养基适用性检查要求。

5、沙氏葡萄糖琼脂+抗生素

无菌性检查：取已灭菌的SDA注皿,于20-25℃培养5天,应无菌落生长。

试验用菌种：

抑菌性检查：枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌

促生长能力：白色念珠菌、黑曲霉 。

常用抗生素：

（1）庆大霉素：广谱。对G-，G+菌有较好的抗菌作用。

（2）氯霉素：广谱。对G-菌作用强；对G+菌作用不及青霉素与四环素。

接种方法：

抑菌性：接种枯草、金葡、铜绿菌悬液不少于100cfu。

促生长能力：接种白色念珠菌、黑曲霉菌悬液不大于100cfu。

适用性检查：

白色念珠菌、黑曲霉于20-25℃培养不大于5天。

与对照培养基比较，菌落平均数比值在0.5-2范围内。

判断标准：枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌不得生长。

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