ATCC BAA-125耐盐芽孢杆菌的培养方法与实验内容！

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耐盐芽孢杆菌是Bacillus属的微生物，原产地为中国。主要用途为研究；教学。

一、菌种简介

平台编号：Bio-81897

规格：Freeze-Dried

拉丁属名：Bacillus Halodurans

菌株名称：耐盐芽孢杆菌

用途：ATCC原装进口

注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准）

二、详细描述

Bacillus halodurans Nielsen et al. 拉丁名

(ATCC? BAA-125?) 统一编号

Strain Designations 菌株别名 JCM 9153 [C-125, FERM 7344]

Application 用途 Produces beta-galactosidase beta-D-galactosidase Produces xylan endo-1,3-beta-xylosidase xylan hydrolase, xylanase Biotechnology

Isolation 分离基物 Soil, 1977

Biosafety Level 生物安全等级 1

Biosafety classification is based on U.S. Public Health Service Guidelines, it is the responsibility of the customer to ensure that their facilities comply with biosafety regulations for their own country.

Product Format 提供形式 freeze-dried

Storage Conditions 生长条件

Frozen 冷冻物: -80°C or colder

Freeze-Dried 冻干物: 2°C to 8°C

Live Culture: See Propagation Section

Preceptrol? no

Genome Sequenced Strain Bacillus halodurans C-125 DNA, complete genome.

Type Strain 模式菌株 no

Comments 注释 Genome sequenced strain

Medium 培养基 ATCC? Medium 18: Trypticase Soy Agar/Broth

Growth Conditions 生长条件

Temperature 培养温度: 37°C

Atmosphere需氧情况: Aerobic

Name of Depositor 寄存人 JCM

Chain of Custody 来源国家 ATCC <-- JCM <-- K Horikoshi

Isolation 分离基物 Soil, 1977

References 参考文献 Takami H, Horikoshi K. Reidentification of facultatively alkaliphilic Bacillus sp. C-125 to Bacillus halodurans. Biosci. Biotechnol. Biochem. 63: 943-945, 1999.

JCM, personal communication

Cross References Nucleotide (GenBank) : BA000004 Bacillus halodurans C-125 DNA, complete genome.

三、形态特征

革兰氏阳性、杆菌、有芽孢、菌落形态为圆形、中间凸起、边缘整齐、白色、光滑、透明；多数运动；鞭毛典型侧生；有机化能营养；严格好氧或间性厌氧；形成内生孢子；不形成丝状体；暴露与空气中不妨碍孢子的形成；营养体的最高生长大约从25℃到75℃以上；最低生长温度大约在5℃到45℃。

四、培养方法

1、菌种是指食用菌菌丝体及其生长基质组成的繁殖材料。菌种分为母种（一级种）、原种（二级种）和栽培种（三级种）三级。工业发酵的有用菌种，其筛选步骤包括菌种分离、初筛和复筛。

2、挑选具有某种能力的有用菌种，也称种子制备，是指菌种在一定条件下，经过扩大培养成为具有一定数量和质量的纯生产菌种的制备过程。以作接入发酵罐中进一步扩大菌体量及合成产物之用。

3、种子制备包括孢子制备和菌丝体制备菌种制备。

4、保存在沙土管或冷冻管中的生产菌种，用无菌手续挑取少许，接入琼脂斜面培养基上，在25℃（或较高温度）下培养5～7天（或较长时间。所得孢子还需进一步用较大表面积的固体培养基以获得更多孢子（对于霉菌类孢子制备，多数采用大米、小米之类的天然培养基）。

5、将培养成熟的斜面孢子制成悬浮液，接种到扁瓶固体培养基上，于25～28℃培养14天。将成熟的扁瓶孢子于真空中抽干，使水分降至10%以下，并放入 4℃冰箱中备用。一次制得的孢子瓶可在生产上延续使用半年左右。

6、如果有些生产菌种不产孢子，如赤霉素产生菌或产孢子不多的，则可采用摇瓶液体培养制得菌丝体，作种子罐的种子。种子罐的目的是使接入有限的孢子或菌丝体迅速发芽、生长、繁殖成大量菌体。其中的培养基组分应是易于被菌体利用的碳源（如葡萄糖）和氮源（如玉米浆），及无机盐(如磷酸盐)等。作为发酵罐的种子应生命力旺盛、染色深、菌丝粗壮，无杂菌及异常菌体。接种量一般在10%～20%。

五、实验内容

1、称量→溶化→调ph→过滤→分装→加塞→包扎→灭菌→无菌检查

2、干热灭菌：装入待灭菌物品→升温→恒温→降温→开箱取物

3、高压蒸汽灭菌：加水→装物品→加盖→加热→排冷空气→加压→恒压→降压回零→排汽→取物→无菌检查

4、过滤除菌：组装灭菌→连接→压滤→无菌检查→清洗灭菌

六、保藏方法

1、传代培养保藏法

又有斜面培养、穿刺培养、疱肉培养基培养等(后者作保藏厌氧细菌用),培养后于4-6℃冰箱内保存。

2、液体石蜡覆盖保藏法

是传代培养的变相方法,能够适当延长保藏时间,它是在斜面培养物和穿刺培养物上面覆盖灭菌的液体石蜡,一方面可防止因培养基水分蒸发而引起菌种死亡,另一方面可阻止氧气进入,以减弱代谢作用。

3、载体保藏法

是将微生物吸附在适当的载体,如土壤、沙子、硅胶、滤纸上,而后进行干燥的保藏法,例如沙土保藏法和滤纸保藏法应用相当广泛。

4、寄主保藏法

用于目前尚不能在人工培养基上生长的微生物,如病毒、立克次氏体、螺旋体等,它们必须在生活的动物、昆虫、鸡胚内感染并传代,此法相当于一般微生物的传代培养保藏法。病毒等微生物亦可用其他方法如液氮保藏法与冷冻干燥保藏法进行保藏。

5、冷冻保藏法

可分低温冰箱(-20-30℃,-50-80℃)、干冰酒精快速冻结(约-70℃)和液氮(-196℃)等保藏法。

6、冷冻干燥保藏法

先使微生物在极低温度(-70℃左右)下快速冷冻,然后在减压下利用升华现象除去水分(真空干燥)。有些方法如滤纸保藏法、液氮保藏法和冷冻干燥保藏法等均需使用保护剂来制备细胞悬液,以防止因冷冻或水分不断升华对细胞的损害。

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