间型假丝酵母的培养方法与活化步骤及操作说明！

                  间型假丝酵母的培养方法与活化步骤及操作说明！

间型假丝酵母是Candida属的微生物，原产地为中国。白色至奶油色的奶油样菌落，营养体细胞出芽生殖，有简单至复杂的假菌丝，无有性生殖。主要用途为研究，具体用途为近海酵母。

一、菌种简介

平台编号：Bio-06219

提供形式：冻干物

拉丁属名：Candida Intermedia

中文译名：间型假丝酵母

拉丁学名：Candida intermedia

菌株来源：←中国科学院微生物研究所

保藏人：钟耀明

直接来源国家：中国

保藏时间：12/1/1958

生物危害：四类

模式菌株：非模式菌株

菌株用途：色氨酸；尿酸酶

培养温度：25-28℃

培养基：0013    

分离源：柿子

采集国家：中国

用途：色氨酸；尿酸酶

注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准）

二、微生物培养方法

1、平板划线分离法：把混杂在一起的微生物或同一微生物群体中的不同细胞用接种环圈在平板培养基表面，通过分区划线稀释而得到较多独立分布的单个细胞，经培养后生长繁殖成单菌落。

2、稀释涂布平板法将菌液进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面进行培养，在稀释度足够高的菌液里，聚集在一起的微生物将被分散成单个细胞，从而能在培养基表面形成单个菌落。

上述两种方法虽然都可以实现观察菌落特征的目的，但平板划线分离法不能对菌落计数，而稀释涂布平板法培养过程复杂，对平板的要求比较高，可参照以下步骤：

a、制备平板培养基将氯化钠蔗糖琼脂培养基加热溶化并冷却至65℃，向氯化钠蔗糖琼脂培养基中加入克林霉素溶液3～5ml并混合均匀，然后取20ml混合均匀的培养基溶液倒入培养皿，轻轻摇动培养皿，使培养基溶液均匀分布在培养皿底部，待培养基溶液凝固后即得平板培养基。

b、制备活性污泥混合液称取活性污泥土样15g，放入盛100ml无菌水并带有玻璃珠的三角烧瓶中，振摇15～20min混合均匀，用一支1ml无菌吸管从中吸取1ml土壤悬液加入盛有9ml无菌水的大试管中充分混匀，制成活性污泥混合液。

c、培养基涂布从活性污泥混合液中吸取0.2ml，滴在平板培养基表面的中央位置，用无菌玻璃涂棒将活性污泥混合液沿同心圆方向轻轻地向外扩展，使之分布均匀。

三、实验内容

1、称量→溶化→调pH→过滤→分装→加塞→包扎→灭菌→无菌检查

2、干热灭菌：装入待灭菌物品→升温→恒温→降温→开箱取物

3、高压蒸汽灭菌：加水→装物品→加盖→加热→排冷空气→加压→恒压→降压回零→排汽→取物→无菌检查

4、过滤除菌：组装灭菌→连接→压滤→无菌检查→清洗灭菌

四、活化步骤

冻干粉活化，将菌粉甩至底部，将尖头一侧用酒精消毒后敲开，取0.2-0.3ml溶解液加入至菌种管中，轻轻弹至菌粉混合均匀，用无菌吸头全部吸出溶解液，全部接种至2支斜面上培养。注意真空菌种管一旦敲开里面的冻干粉就必须全部被用掉，留着也没用。如果有不明白之处，应先与我司联系，避免不必要的损失。

五、菌种培养注意事项

1、微生物菌种应保存于低温、清洁和干燥的地方，室温放置时间过长会导致菌种衰退；

2、菌种操作在无菌条件下进行，接种完毕应该灭菌再做丢弃处理；

3、斜面菌种和穿刺菌种保存时间通常为 3-6 个月，应根据菌种状况及时结转；冻干粉保存时间通常是 2-25 年；甘油菌保存时间为 2-5 年;

4、冻干首-次活化，干粉要全部用完，不能保留。用0.2-0.5m1的培养液或者无菌水溶解,接种在1-2个平板上，因冻干菌种处于休眠状态，请勿接种多个平板，以免因接种量不足而导致复苏不成功。

5、如果有不明白之处，应先与我中心联系，避免不必要的损失。

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