细菌冻存液的作用与应用及使用注意事项有哪些？

                  细菌冻存液的作用与应用及使用注意事项有哪些？

一、背景

细菌冻存液是一种专门用于冷冻保存各种常见细菌的试剂。其有效成分为甘油，具有保护细菌在低温冷冻条件下存活的作用。根据品牌和规格的不同，细菌冻存液的保存条件和保存时间也有所差异。一般来说，在-20℃条件下，细菌冻存液可以保存菌种12个月，而在-70℃或-80℃条件下则可以长期保存。

细菌冻存液是专门用于保存细菌的溶液，它可以使细菌在低温下长期保持活性。

细菌冻存液的主要作用是在低温条件下保护细菌免受损害，使其能够在解冻后仍然保持原有的生物学特性和活性。这种液体通常含有防冻剂和其他添加剂，如DMSO（二甲基亚砜）或甘油，这些成分可以防止细胞在冷冻过程中因水分结晶而受损。使用细菌冻存液时，通常将待保存的细菌沉淀重悬于冻存液中，然后将其存放在-20℃或-80℃的条件下，以实现短期或长期保存。

此外，在使用细菌冻存液时，需要遵循一定的操作步骤，以确保细菌的活性。首先，将细菌接种于肉汤培养基中，在适宜的温度下培养至适当的生长阶段。然后，将细菌与等体积的冻存液混合，并分装到冻存管中。最后，将冻存管放入-20℃或-80℃的冰箱中保存。需要注意的是，冻存液应避免反复冻融，以免影响细菌的存活率。

二、使用细菌冻存液时，需要注意以下几点

细菌冻存液必须在超净台内使用，以避免杂菌污染。

细菌冻存液必须与细菌混匀，否则无法起到在低温冷冻条件下对细菌的保护作用。

新鲜的对数期细菌冻存效果最好，但非对数期的或不是新鲜培养的细菌也可以用细菌冻存液冷冻保存。

为了安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

总的来说，细菌冻存液是微生物学和生物实验室中不可或缺的试剂，能够有效地保持细菌的活性和稳定性，为科研和实验工作提供便利。但使用时也需遵循一定的规范和注意事项，以确保实验结果的准确性和可靠性。

请注意，不同品牌或类型的细菌冻存液可能具有不同的成分和使用方法，因此在具体使用时，应参考产品说明书或咨询专业人士的建议。此外，细菌冻存液的处理和保存也需遵循相关生物安全规定，以防止对环境和人员造成危害。

三、应用

细菌冻存液可以用于幽门螺杆菌黏附素BabA蛋白结合区特征及其作用分析：

对crown区β折叠中的氨基酸及其之间形成的氢键进行分析,在保留黏附相关空间结构的前提下寻找相对分子量更小的蛋白,本部分体外克隆表达三种蛋白:BabA蛋白(BabA蛋白胞外段,即删除信号肽部分的全长蛋白)、Crown蛋白(BabA蛋白crown区)、C51蛋白(crown区截短蛋白)。与Crown蛋白相比,C51蛋白中减少了23个氨基酸,其中11个氨基酸位于β片层中,12个氨基酸位于β片层一侧的环状结构中。

通过生物膜干涉技术分析三种蛋白与受体Lewis b的结合力,BabA、Crown和C51与Lewis b的结合亲和力(Kd)分别为12.1μM、213μM和241μM,说明三个蛋白均能与Lewisb结合,Crown和C51蛋白的受体结合力均低于BabA蛋白。通过流式细胞术检测三种蛋白对H.pylori J99与AGS细胞黏附的影响,结果显示,BabA和Crown蛋白分别使J99的黏附数量降低了24.8%(P=0.009)和11.1%(P=0.024),而C51蛋白却使AGS细胞表面J99的黏附数量增加了28.0%(P=0.001)。为了分析出现这种现象的原因,观察三种蛋白对J99细菌凝集的影响,结果显示在自然状态下J99菌株基本呈均匀散在分布,加入C51蛋白后J99明显凝集呈簇,而BabA和Crown蛋白未引起J99明显凝集,这种凝集效应可能是C51蛋白使AGS细胞表面J99的黏附数量增加的原因。

实验室使用细菌冻存液冻存和传代菌株可能发生包括黏附能力及阿莫西林耐药特征的改变,本研究对冻存前与冻存后的H.pylori进行转录组分析,发现下调基因在膜必需组分(GO:0016021)和质膜(GO:0005886)显著富集,膜蛋白表达水平的变化可能与冻存后H.pylori阿莫西林耐药性降低有关。在细菌冻存液冻存菌株中检测到多种黏附素表达水平的改变,如SabA、AlpB等,但BabA表达水平未发生显著改变,提示以BabA为靶点的抗H.pylori黏附作用的研究中,H.pylori菌株的选择不受冻存因素的影响。

本研究通过组织芯片技术研究了胃癌病人胃黏膜中BabA受体的分布情况,首次对Crown蛋白(BabA蛋白crown区)、C51蛋白(crown区截短蛋白)进行克隆表达,比较了三种不同分子量大小的蛋白(BabA、Crown、C51)与受体Lewis b的结合力,并评价了其对H.pylori与AGS细胞黏附的影响,增加了对H.pylori的黏附机制的理解,并为基于BabA蛋白的抗H.pylori药物研究提供了理论基础。通过转录组分析了细菌冻存液冻存可能对幽门螺杆菌的广泛影响,发现对阿莫西林的耐药水平和数种黏附素的表达水平有显著影响,但对BabA表达无明显影响,表明以BabA蛋白为基础的抗黏附体外研究细菌-细胞作用模型具有可行性。

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