小鼠胎儿真皮成纤维细胞提取物的知识与应用研究！

                 小鼠胎儿真皮成纤维细胞提取物的知识与应用研究！

一、背景

小鼠胎儿真皮成纤维细胞提取物是从小鼠原代胎儿真皮成纤维细胞提取的，小鼠原代胎儿真皮成纤维细胞从正常小鼠胚胎组织制备。小鼠胎儿真皮成纤维细胞提取物可以用于基因克隆，表达图谱分析以及各种分子生物学实验的研究。

小鼠胎儿真皮成纤维细胞主要分布于黏膜和皮下疏松结缔组织，胞质内富含嗜碱性颗粒，细胞表面能够表达高亲和力FcεRI，可结合游离IgE，参与I型超敏反应。小鼠胎儿真皮成纤维均来自正常小鼠胎儿真皮组织，采用组织块培养法制备而来。

小鼠胎儿真皮成纤维细胞提取物可以用于评估体外药物模型系统和调节特定基因的遗传功能。小鼠真皮成纤维细胞分离自真皮组织；真皮，位于表皮深层，向下与皮下组织相连，真皮结缔组织的胶原纤维和弹性纤维互相交织在一起，埋于基质内。其内分布着各种结缔组织细胞和大量的胶原纤维弹性纤维，使皮肤既有弹性，又有韧性。其由两层组成——乳头层与网状层。真皮的结构组成是胶原蛋白、弹性纤维以及基质。

二、应用

小鼠胎儿真皮成纤维细胞提取物可用于真皮间充质干细胞对瘢痕疙瘩成纤维细胞生物学活性的影响：

目的通过研究FDMSCs条件培养基(FDMSCs conditioned medium,F-CM)对瘢痕疙瘩成纤维细胞(Keloid fibroblasts,KFs)生物学活性的影响,探索FDMSCs相关疗法治疗瘢痕疙瘩的可行性。真皮成纤维细胞(Adult dermal fibroblasts,ADFs)、FDMSCs和KFs,并应用ADFs和FDMSCs制备ADFs条件培养基(ADFs conditioned medium,A-CM)和F-CM。

KFs分别用空白对照培养基(SFM)、A-CM和F-CM培养,培养48h后对各组KFs进行一系列实验分析,包括细胞形态观察(倒置显微镜下)、细胞数量变化(MTT比色实验)、细胞增殖率和凋亡率改变(BrdU细胞增殖实验和TUNEL细胞凋亡实验)、细胞共培养干预实验和条件培养基干预实验对比、凋亡相关基因和蛋白的表达变化(qPCR和Western blot)、细胞凋亡时期检测(Annexin V-FITC/PI双染细胞凋亡检测)结果通过一系列实验,结果显示相对于对照组和A-CM组,F-CM可以诱导KFs出现凋亡形态,并可减少活细胞的数目。但KFs增殖率没有明显改变但凋亡率明显增加,这说明细胞数目的减少主要得益于细胞凋亡的增多。

FDMSCs与KFs共培养实验的结果同培养基干预KFs实验结果没有明显区别。进一步实验表明F-CM可促进细胞促凋亡蛋白BCL-2的表达并抑制细胞抑凋亡蛋白BAX的表达,导致BCL-2/BAX升高而促进细胞凋亡。Annexin V-FITC/PI双染细胞凋亡实验结果表明细胞凋亡时期主要为晚期凋亡。

结论：

(1)FDMSCs可成功从早期人胎儿皮肤中提取并进行体外培养、传代,并能维持稳定的生物学特性。

(2)F-CM干预KFs实验结果与细胞共培养干预实验结果一致,避免了FDMSCs直接应用于机体的潜在风险。

(3)F-CM可以通过抑制细胞抑凋亡蛋白BCL-2的表达并促进细胞促凋亡蛋白BAX的表达来促进细胞凋亡。

(4)F-CM所诱导的KFs凋亡时期主要为晚期凋亡。

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