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ATCC细胞操作指南
ATCC细胞操作指南http://www.yajimall.com/article/aboutus.html
收到细胞的注意事项
冻存的ATCC细胞株和杂交瘤细胞株在运送过程中使用干冰保持低温。收到冻存细胞后，可以立即解冻复苏，去除二甲基亚砜（DMSO）后进行细胞培养。如果不立即复苏培养细胞，必须将细胞冻存管放置于液氮罐存储。请不要将细胞存储在-130℃以上的温度。如果温度不够低，达不到-130℃，细胞活力会迅速下降。
产品说明书和质检报告（COA）
ATCC每个细胞株都有一份产品说明书（product sheet），其中包含细胞株的信息和详细的操作指南。细胞株的所有详细介绍可以在
ATCC网站找到，产品说明书和COA也可以从ATCC网站下载。
冻存细胞的复苏和培养
1.先准备好细胞培养皿或细胞培养瓶，及产品说明推荐的相应细胞培养基。并在37℃水浴中预先温热细胞培养基。
2.小心取出装有细胞的冻存管，保持管盖拧紧，将冻存管盖以下的部分置于37℃水浴中并轻微的搅拌以帮助解冻。解冻过程应该尽快，
大约短于2分钟或待最后一块小冰晶体刚融化，就应将细胞冻存管取出水浴。
3.在从水浴中取出的细胞冻存管表面喷洒70%乙醇配制的消毒剂，用无菌纸巾或纱布试干。之后的操作步骤都应该遵循在无菌条件下
生物安全柜中严格操作。
4.小心拧开冻存管的顶部，将管内容物用1ml移液枪转移到含9毫升培养基的无菌离心管中。离心5到7分钟(125×g),小心吸去上清液以
去除抗冻剂(二甲基亚砜)，避免丢失细胞沉淀。将细胞沉淀重悬于配好的完全培养基中。将细胞悬液转移到培养容器，轻轻摇晃使细胞均匀
的分布。生长较慢的细胞株可重悬于5-8ml培养基并转移到T25培养瓶。生长较快的细胞株可重悬于12-20ml培养基并转移到T75培养瓶。
ATCC网站有各个细胞株的具体生长状况及培养方法记载。
5.将细胞培养容器置于细胞培养箱，在温度37℃,二氧化碳浓度5%的培养条件下进行孵育。细胞培养24小时后应在显微镜下观察细胞形态和生长状况。
为了确保细胞活力、遗传基因型稳定和表型的稳定，细胞株的培养需要保持在对数期。这意味着需要定期对细胞进行传代。并且注意在细胞
进入生长平台期之前，即单层细胞100%汇合长满前或悬浮细胞达到其推荐的最大细胞密度之前，要进行细胞传代。监测细胞生长和绘制每个
细胞株的生长曲线都有助于确定细胞株的生长特性。
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