HEK293人胚肾细胞系的作用与应用及相关研究！

                   HEK293人胚肾细胞系的作用与应用及相关研究！

一、背景

HEK293人胚肾细胞系也被称为人胚胎肾细胞293（Human Embryonic Kidney 293），它是一种永生化细胞系，衍生自人胚胎肾脏。这些细胞具有转染效率高，易于培养等特点。HEK293细胞系是由荷兰生物学家Alex van der Eb在1973年从人类肾脏细胞中首次分离出来的。这些细胞是在女性胎儿的组织培养物中生长的。后来，Van der Eb实验室的博士后研究员Frank Graham对这些细胞进行了剪切的人类腺病毒5型DNA转染，使其能够非常有效地产生大量重组蛋白。因此，该细胞系被命名为HEK293，以纪念这次实验是Frank Graham的第293次实验。

二、HEK293人胚肾细胞系细胞培养操作

1)复苏HEK293人胚肾细胞系细胞：以下细胞培养冻存处理仅供参考，具体操作步骤以随货产品说明书为主。

将含有1 mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加4 mL培养基混合均匀。在1000 rpm条件下离心3 min，弃去上清液，加1-2 mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入含适量培养基的培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10 cm皿中，加入约8 mL培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。

2)HEK293人胚肾细胞系细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

a、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

b、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，使消化液浸润所有细胞，弃去消化液，将培养瓶置于37℃培养箱中消化1 min，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。

c、按6-8 mL/瓶补加培养基，轻轻打匀后装入无菌离心管中，1000 rpm离心4 min，弃去上清液，补加1-2 mL培养液后吹匀。

d、将细胞悬液按1:2比例分到新的含8 mL培养基的新皿中或者瓶中，置于培养箱中培养。

3)HEK293人胚肾细胞系细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面T25瓶为例；

a、收集细胞及细胞培养液，装入无菌离心管中，1000 rpm条件下离心4 min，弃去上清液，用PBS清洗一遍，弃尽PBS，进行细胞计数。

b、根据细胞数量加入无血清细胞冻存液，使细胞密度5×106~1×107/mL，轻轻混匀，每支冻存管冻存1mL细胞悬液，注意冻存管做好标识。

c、将冻存管放入-80℃冰箱，24 h后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。

三、应用

HEK293人胚肾细胞系可以用于氧化应激在氢醌致人胚肾细胞HEK293 DNA损伤中的作用：

氢醌(1,4-dihydroxybenzene,HQ)是一种重要的工业化学品,可作为摄影工业的显影剂,橡胶工业的抗氧化剂,食品的抗氧化剂生产中间体,并作为聚合乙烯和丙烯酸为单体抑制剂。日常生活中通过某些药物、化妆品也可长时间接触。HQ是苯的代谢物,在苯毒性效应中发挥着重要作用。HQ主要在肝内代谢,经尿排出而解毒；部分富集于骨髓组织,进一步代谢生成对苯醌和对苯半醌。人群流行病调查及实验动物研究均发现长期接触HQ可对肝、肾、骨髓造血造成损伤。1999年,国际癌症研究机构(International Agency for Research on Cancer,IARC)就将HQ归为第三类致癌物,即现有证据尚不能就其对人类致癌性进行分类。体外实验表明,HQ可引起染色体突变。

研究选用HEK293细胞作为试验系统,探讨HQ的DNA损伤作用及可能机制,旨在为评估HQ对人类健康的危害提供有价值的实验室依据。

方法：试验系统为HEK293人胚肾细胞系。通过改良的单细胞凝胶电泳(SCGE)试验检测细胞DNA损伤情况。通过罗丹明123(Rh123)和吖啶橙(AO)分别测定细胞内线粒体膜电位和溶酶体膜稳定性；通过2’,7’—二氢二氯荧光素二乙酸酯(DCFH-DA)和苯二醛(OPT)分别测定细胞内活性氧(ROS)及还原型谷胱甘肽(GSH)水平。用免疫组化方法测定8-羟基脱氧鸟苷(8-OHdG)在细胞内的表达水平。为探讨其可能的氧化性机制,采用DL—甲硫氨酸磺酰亚胺(BSO)和抗氧化物质羟基酪醇(HT)干预法测定细胞内ROS水平及线粒体膜电位对HQ所致DNA损伤效应的影响。

结果：HQ(3.125,6.25,12.5μM)作用于细胞后,DNA的迁移距离明显增加,且呈剂量依赖关系；作用于HEK293细胞可引起细胞内溶酶体膜稳定性的破坏和线粒体膜电位的下降,也可使细胞内ROS表达水平的明显增加及GSH的耗竭；明显增加HEK293人胚肾细胞系内8-OHdG水平。HT能够拮抗HQ引起的DNA链断裂的形成；BSO能够加剧HQ引起的DNA链断裂的损伤。

结论：HQ可致HEK293人胚肾细胞系DNA损伤,其作用机制可能是通过线粒体膜电位的下降,溶酶体膜破坏,细胞内ROS产生增高及GSH的耗竭,进而导致氧化性DNA损伤。

北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！