通过LC-MS/MS测定全血中的裸鼠素，解开神奇蘑菇之谜——定量血液样本中的裸鼠素以支持临床和法医调查

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概述

科学家现在可以通过使用 SPE 和 LC-MS/MS 的新分析工作流程直接量化全血样本中的裸鼠素（psilocin，有的译作“赛洛辛”，一种致幻剂），这将有助于支持对迷幻蘑菇活性成分的临床和法医研究。

从迷幻的嬉皮士到开创性的治疗

“迷幻蘑菇”中发现的致幻色胺曾经是 20 世纪 60 年代反主流文化的主要内容和叛逆的象征，如今作为治疗一系列神经系统疾病的潜在疗法正在复兴。裸盖菇素的临床研究取得了有希望的结果，裸盖菇素（psilocybin）是在裸盖菇中发现的，裸盖菇素在治疗抑郁症、创伤后应激障碍 (PTSD) 和焦虑方面的临床研究取得了有希望的结果。裸盖菇素还可以促进大脑生长和重组、减少炎症并对抗氧化应激。这为更有针对性的治疗方法开辟了令人兴奋的可能性，这些治疗方法可以解决神经退行性疾病的根本原因，而不仅仅是症状。临床进展伴随着迷幻蘑菇及其活性成分的非刑事化。然而，这种日益流行也导致了真菌误用和滥用的增加。

裸盖菇素实际上是具有药理活性的裸鼠素的前药，裸鼠素在肝脏中去磷酸化，产生活性代谢物裸盖菇素。已有报道采用基于 LC 和 GC 的方法来测量尿液、血浆和血清中的裸鼠素。然而，裸鼠素的血液与血浆比率尚不清楚，处理血液以分离血清或血浆可能会导致裸鼠素的酶促降解。因此，山姆休斯顿州立大学（美国德克萨斯州）的 Madeline Swortwood 及其同事开发了一种基于 SPE 和 LC-MS/MS 的新型分析工作流程，用于定量检测全血中的裸盖菇素，用于临床研究和法医毒理学测试。

令人惊讶的高响应

首先，Swortwood 及其同事通过直接将裸鼠素和裸鼠素-d10 注入质谱仪来优化 MS/MS 参数。氘代内标给出了令人惊讶的高响应，因此样品中的浓度从 10 ng/mL 降低至 3 ng/mL，以在整个校准范围内分析物和内标响应之间提供一致且平衡的比例。

首先尝试了简单的液-液萃取，但回收率和色谱法并不令人满意，因此作者希望改用固相萃取。他们使用 Polychrom CEREX Clin II 和 UCT CleanScreen DAU SPE 柱评估了不同的洗脱溶剂和方案，最终选择了 Polychrom Clin II SPE 柱。简而言之，全血中加入了校准品或 QC，以及内标、磷酸盐缓冲液和抗坏血酸，这已被证明可以防止提取过程中裸鼠素的氧化。然后将样品涡旋并离心，并将上清液加载到 SPE 柱上。使用温和的真空将样品拉过 SPE 柱。然后用水、甲醇和乙酸乙酯洗涤负载的SPE柱，真空干燥，并用2% NH 4 OH的乙酸乙酯溶液洗脱。洗脱液干燥后，将残留物重新溶解于 90：10 流动相 A:B 中，并将 5 µL 注入 LC-MS/MS 系统进行分析。

使用连接到 Agilent 6470 三重四极杆 MS/MS 检测器的 Agilent 1290 Infinity II 液相色谱仪进行分析，并使用设置为 35 的 Agilent Infinity Lab Poroshell 120 EC-C18 色谱柱（2.7 µm，2.1 × 100 mm）分离分析物。 °C 使用梯度。流动相 A 为含有 0.01% 甲酸的 5 mM 甲酸铵水溶液，而流动相 B 使用含有 0.1% 甲酸的乙腈溶液。包括重新平衡步骤在内，总运行时间为 6 分钟。

考虑到缺乏裸鼠素的血液/血浆数据，该方法的线性范围为 0.78-200 ng/mL，以匹配先前在血浆和血清样品中建立的范围。分析人员根据 ANSI/ASB 036 指南成功验证了该方法，并且样品在冰箱中可稳定保存长达 48 小时。SPE 方案的回收率≥89%，色谱干扰最小。

打开临床进步的“感知之门”

报道的方法允许分析人员直接量化全血中“迷幻蘑菇”中的活性成分裸鼠素，这应该有利于临床和法医调查。这种方法将使临床医生能够将裸盖菇素水平与临床试验中患者的反应相关联，同时也让法医专家更清楚地了解裸盖菇素相关病例的潜在损害。作者指出，虽然一些法医科学家可能倾向于分析更稳定的代谢物 裸鼠素-O-葡萄糖醛酸，但关注活性代谢物裸鼠素可以提供有价值的见解。下一步将是使用真实样本进行概念验证测试。

相关链接

（1）Gomonit MM, Skillman B, Swortwood MJ. Quantification of psilocin in human whole blood using liquid chromatography–tandem mass spectrometry (LC–MS/MS). J Forensic Sci. 2023. https://doi.org/10.1111/1556-4029.15454

（2）De Vooght-Johnson R. Provenance of peculiar psilocin peak proved. Wiley Analytical Science. 17 November 2022 (https://analyticalscience.wiley.com/content/article-do/provenance-peculiar-psilocin-peak-proved; accessed 4 January 2024).

（3）De Vooght-Johnson R. Know your mushrooms: LC-MS method confirms ingestion of toxic fungi. Wiley Analytical Science. 15 July 2021 (https://analyticalscience.wiley.com/content/article-do/know-your-mushrooms-lc-ms-method-confirms-ingestion-toxic-fungi; accessed 4 January 2024).

作者简介

Ryan De Vooght-Johnson

瑞安是一位自由科学作家和编辑。获得仪器和分析方法硕士学位后，他在制药行业担任过各种分析开发职务，然后担任编辑职位。作为委托编辑，他创办了两本与分析化学和制药相关的期刊《生物分析》和《治疗交付》，并管理了许多其他期刊。他现在是一名自由科学作家和编辑，这样他就有更多的时间陪伴家人、骑自行车和管理菜园。

原文：Magic mushroom mystery managed with LC-MS/MS determination of psilocin in whole blood，WILEY Analytical Science Journals ，9 January 2024

供稿：符 斌