又一篇nature！Panta助力精子特异性溶质载体SLC9C1的结构解析

https://doi.org/10.1038/s41586-023-06629-w

SpSLC9C1以同二聚体的形式组装，通过结构解析，作者明确识别SpSLC9C1不同的结构域：TD、VSD和CTD（包括CNBS和CH1-9）。

图1：SpSLC9C1在序列水平上的结构域排列

环核苷酸可以使得SLC9C1在静息电位激活，cAMP的激活效果比cGMP高。

作者又解析了SLC9C1在cAMP与cGMP存在的情况下的结构（图2A）。发现结合cAMP的SLC9C1结构有很高的构象异质性，特别是CTD。分析发现cAMP破坏了β-CTD之间的二聚体相互作用，导致CTD偏离对称轴。为了进一步表征cGMP和cAMP结合对SpSLC9C1的影响，作者分析分离的CTD (S946-E1193， CNBD和β-CTD) 在加入cAMP和cGMP后T_m的变化。从结构信息来看，cGMP的加入未引起SLC9C1构象上明显改变，对应的ΔT_m变化可能很小。因此，需要一种高精度和重复性的方法进行检测。

nanoDSF技术检测T_m精度为±0.1℃，避免重复性差造成的假阴性问题。实验时，无需加入染料，也不存在染料分子造成的不兼容或者对蛋白的其他影响。nanoDSF检测显示，环核苷酸诱导CTD的热稳定性增加，其中cAMP产生6°C的位移，而cGMP仅观察到2°C，结果证实了cAMP对SpSLC9C1有较高的增强作用。

图2：

A.加入cGMP和cAMP后SpSLC9C1 -CTD结构；

B.Panta nanoDSF模块检测SpSLC9C1 -CTD(蓝色)以及加入cGMP(紫色)和cAMP(橙色)后T_m

综上，cAMP结合在CNBD结构域后也可以破坏β-CTD的相互作用，使其可以在更接近静息电位下被激活，进而进行钠/氢交换，揭示了SLC9C1电压调节与cAMP调节的钠/氢交换机制。

Panta nanoDSF模块具有极高数据重复性和准确性，确保您获得准确的T_m值。实验时无需加入染料，操作简单的同时，保证了实验结果。

此外，Panta整合了DLS、SLS、背反射和nanoDSF四大检测模块，只需一份样品，便可以获得多种稳定性参数。

PR Panta蛋白稳定性分析仪