艾滋病(AIDS)是一种危害性极大的传染病,由感染艾滋病病毒(HIV)引起,自从引入(联合)抗逆转录病毒疗法(ART)以来,HIV-1感染已从一种致命疾病转变为一种(可控制的)慢性疾病。然而,尽管抗逆转录病毒疗法在抑制病毒在个体中的复制方面是有效的,但它并不能治愈HIV-1感染。这是由于存在一个持久的(潜伏的)库,其中包含一小部分具有复制能力的完整前病毒(1-5%),在抗逆转录病毒治疗停止后为病毒复制提供燃料。为了消除这一病毒库我们应该对于这些完整原病毒有准确的评估。
在这里,提出了两种三色数字PCR检测方法,这两种方法是由两种现有方法组合而成的,IPDA(基于2色数字PCR的方法)和Q4PCR检测(4色qPCR方法),并在naica微滴芯片数字PCR平台上测试了功能。验证了它们在潜伏感染的Jurkat细胞系模型和HIV-1患者样本上的性能。数据证明了增加IPDA中HIV-1亚基因组区域数量的潜力和灵活性,以获得对HIV-1库的敏感检测,同时受益于dPCR设置的优势。
研究方法和结果:
结合IPDA(基于2色数字PCR的方法)和Q4PCR检测(4色qPCR方法),并在naica微滴芯片数字PCR平台上进行实验。
结果表明,对于三重分析的初始验证,对每个分析、原始的双色IPDA分析和新的IPDA分析进行了单效反应,在两个独立的实验中对50 ng J-Lat 8.4 gDNA进行了两个三重分析:定量结果和理论值一致,重复性好,各靶标阴阳性微滴区分良好。
j - lat8.4基因组DNA检测性能
为了深入了解这两种三重检测在更复杂样品中的功能,我们将工作流程应用于来自HIV-1患者的5个PBMC样品,由于这些样品的病毒载量较低无法检测,并且正在接受ART治疗,检测结果均检测出了HIV-1。在此之后,我们观察到ENV试验对于PSI分析,SLR_26几乎没有检测到GAG或POL,这表明在PSI和ENV序列中可能存在缺失或突变,如果仅有这两个基因的话,可能该病人会被判定为阴性,但经多重数字PCR检测后,GAG和POL均被检测出来,因此数字PCR检测的必要性不言而喻。
文章结论:
在这项研究中,成功地实施了三重数字PCR分析,通过在三色dPCR平台上整合先前描述的IPDA和Q4PCR方法,来定量HIV-1患者样本中的HIV-1 DNA库。受益于dPCR设置的优势,这种方法增加了IPDA上HIV-1亚基因组区域的数量,提高了对库的敏感检测,降低了结果误判的可能性。尽管研究中纳入的患者样本有限,但展示了多重定量分析在HIV-1病毒库分析中的潜力,因为这些完整性分析甚至可以在dPCR系统中进一步扩大使5或6色复用。
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