叮！您有一份色谱柱维修报告，请注意查收！

当您的色谱柱出现异常，您知道其中的原因和预防方案吗？

今天小编就为您带来一份色谱柱的维修报告，让我们一起来看看反相液相色谱柱的常见污染现象，查找其中的原由，并学习多种可行的预防方案。

柱压变高，柱效变低，出峰峰形异常等。

1、中药类样品成分复杂，如前处理方式不当，则容易引起强保留成分积留在色谱柱入口端，导致色谱柱压力升高，柱效下降，峰形异常，或在色谱图中出现“鬼峰”。

2、蛋白类样品积累：生物类样品易在柱头累积，导致柱压升高，柱效下降。

3、其他：如胶状、絮状等样品通过过滤无法去除，也会积压在筛板和柱头端，引起柱压升高。

4、流动相一次配置使用超过12小时变质，生成的絮状物导致色谱柱的污染。

1、中药等成分复杂的样品：开发合适的前处理方法，采用SPE小柱、萃取等方法，减少样品溶液中的易污染成分。

2、蛋白类样品的积累：定期进行色谱柱的冲洗维护，推荐使用乙腈-水-三氟乙酸（50:50:0.1）作为洗脱试剂，低流速过夜冲洗。

3、其他：如胶状、絮状等样品无法通过过滤去除，从而污染柱筛板和柱头的情况，建议最好在样品处理或方法工艺上去优化解决。

4、使用保护柱，且在保护柱能力下降后，要及时地更换新的保护柱芯。柱压升高>10%；柱效下降>10%；分离度下降>10%，均是需要更换保护柱芯的信号。

5、对于检测复杂样品的色谱柱，建议定期按色谱柱说明书的异常再生方法进行色谱柱的再生维护，目的是定期去除柱头的强保留污染物质。

6、12小时最长不超过24小时更换流动相以及储液瓶。

1、柱压升高，柱效低，峰形拖尾或前延等现象。

2、色谱柱填料板结，打开色谱柱后，会发现，填料颜色不变，但填料成片状、块状、结晶等结块现象。

1、流动相配置时间过长，流动相长菌，或乙腈等有机相长时间放置产生絮状沉淀。

2、如上述填料污染的原因中，样品成分复杂，容易被柱头端填料吸附，特别如样品中含有蛋白类物质，在柱头端填料进行富集，则易导致填料污染板结。

3、其他：如胶状、絮状等样品通过过滤无法去除，样品进入色谱柱后积压在筛板和柱头端。

1、流动相按需配置，纯水流动相一次配置使用不超过24小时，其他含有有机相流动相一次使用不超过3天。

2、检测复杂样品的色谱柱污染预防方案，可参见上文一中的填料污染预防。

一般会出现柱压高，柱效低，峰形拖尾或前延，出峰漂移等。此类损伤的色谱柱，异常再生或维修一般无法改善。

1、除了特殊说明，硅胶基质的色谱柱的长期使用pH范围是2-8，流动相或样品溶液的pH较高或较低，均会加快键合相的脱落和硅胶的破碎。

2、柱温较高，加快了缓冲盐对硅胶基质的攻击，导致键合相脱落和填料塌陷。

3、小基团键合相，本身的性质较易脱落，是属于正常的填料性质表现的现象。

4、长期在高压条件下使用色谱柱等。

● 避免键合相脱落

1、样品溶液和流动相的pH控制在长期适宜的使用范围内，样品溶液pH异常，使用保护柱，或者更换月旭LP（耐受pH≤2）系列或Xtimate 系列（耐受pH≥8）。

2、根据色谱柱的键合相性质，选择合适的试剂作为流动相。如非极性键合相，避免使用非极性溶剂；中级性键合相，避免使用中等极性溶剂；极性键合相，避免使用极性溶剂。

3、参考月旭液相色谱柱说明书中的存储条件。

● 避免基质破碎

1、除特殊说明，硅胶基质色谱柱使用的流动相和样品溶液pH不超过8。

2、按照色谱柱说明书，选择适宜的柱温，避免高温。

3、避免压力脉冲，高压等。

需要注意，月旭的反相液相色谱柱一般建议正向使用，反接冲洗。但对于已经存在填料塌陷的色谱柱，不建议反接冲洗色谱柱，以免对色谱柱造成进一步的损伤。

一般会出现柱压高，柱效低，峰形拖尾等。

1、使用的过滤膜材质不对或质量不好，引入了新的物质到流动相或样品中，导致筛板和填料污染。

2、仪器系统长时间未经过彻底清洗。

3、流动相中的缓冲盐和离子对试剂使用前后没有过渡和有效的冲洗，析出，堵塞筛板和填料。

4、在梯度使用的过程中，有机相比例高于60%，变换速率过快，有缓冲盐析出。

5、不当的运输引起的颗粒物脱落等堵塞筛板。

1、更换更加耐受、质量更好的过滤器材（请参考月旭微信公众号中关于过滤材质选择的文章）。

2、泵后清洗溶剂和洗针溶剂定期更换，建议一周更换一次，仪器系统定期使用40度温水，有机溶剂等彻底清洗。

3、色谱柱使用前后用过渡流动相过渡掉系统中高有机溶剂或者高盐相（参考月旭液相色谱柱说明书中新柱活化项下方法）。

4、减缓流动相的变化速率，降低最高有机相的比例。

5、新柱子严格按照说明书活化后使用，如活化时发现压力偏高，说明运输及保存过程中色谱柱保存溶液有损失，此时宜选用低流速过夜的方式活化色谱柱。如低流速过夜活化色谱柱后，压力依然偏高，则可能是不当运输引起了筛板堵塞，需要联系厂家寄回维修排查。