凝结芽孢杆菌的测定方法!百欧博伟生物
一、蛋白胨稀释液的制备:
将1g蛋白胨(细菌蛋白胨除外)溶于1000ml去离子水中,用盐酸调节pH至7.0,灭菌温度为121℃。时长15分钟。
二、微量元素溶液制备:
微量元素水溶液营养成分的组成如表1所示
表1.微量元素溶液组成
三、液化GYE琼脂培养基的制备:
营养成分的组成如表2所示
表2.液化GYE琼脂培养基营养成分的组成
使用乳酸溶液调节上述营养成分混合液pH到6.3。将混合液转移到大锥形瓶中,向锥形瓶中加入15.0g琼脂。使用铝箔包裹锥形瓶,将其放置于加热板上进行加热,并搅摔,直到琼脂完全溶解。随后在高压灭菌锅中在121℃下进行至少15分钟灭菌。待高压灭菌锅可以安全打开时,将锥形瓶放置于50℃的水浴中。
四、样品准备
1、食品取样
称取25g样品,置于无菌均质袋中,加225ml灭菌蛋白胨水,拍击式均质器均质至完全溶解于蛋白胨水,混匀。
注:若样品不能完全溶于蛋白胨水,需要将蛋白胨水预热至50C再加入样品,或加入样品后将混合悬浮液置于50℃预热5min,直至样品完全溶解。
2、检查混合悬浮液pH值。若pH小于7.0,用氢氧化钠(5N)溶液调节pH至8.5±0.2;若pH大于8.7,用盐酸溶液(5N)调节pH至8.5±0.2。
3、样品移取20-30ml均质悬浮液于50ml离心管中于75℃水浴30min,立即冷却至45℃以下,然后移液。
4、移取1.0ml该液于9.0ml灭菌蛋白胨水的试管中,涡旋彻底混匀(10-2稀释管即得)。
5、根据要求重复操作。所做稀释度及平板培养所用稀释度应随预期孢子数变化而变化。
注1:将每个稀释度溶液混匀,然后移液;
注2:步骤3:将离心管置于水浴后立即开启计时器。
五、平板培养
液化GYE琼脂培养基,然后置于水浴中冷却至50℃以下(该培养基容易凝固,要置于50℃左右的水浴锅内) ;每个稀释度准备两个无菌培养皿。分别从最后两个稀释管溶液中加1.0ml于相应编号的培养皿中,然后将15至20ml的熔融培养基倒至各个培养皿,彻底混匀。待固化时,将平板翻转,40℃+2℃培养48小时,同时准备一个只包含琼脂培养基及一个只含有1.0ml蛋白胨稀释液和琼脂培养基作为阴性对照。
六、平板计数
菌落数在30至300之间的平板计数最为理想。平板计数只记录满足以下条件的菌落:琼脂表面的菌落需要直径为1mm到5mm;白色到奶色,凸面,具有完整的边缘和光滑的表面。嵌在琼脂培养基中的菌落需要直径为0. 5mm-1mm在琼脂中具有奶色的点状体。
1、若只有一个稀释度平板上的菌落数在适宜计数范围内,计算两个平板菌落数的平均值,再将平均值乘以相应稀释倍数,作为每g(ml)样品中菌落总数结果。
2、若有两个连续稀释度的平板菌落数在适宜计数范围内时,按公式(1)计算:
N= ∑C/ (n1+0.1n2)d........................ (1)
式中:
N-样品中菌落数:
∑C - 平板(含适宜范围菌落数的平板)菌落数之和:
n1 - 第一稀释度(低稀释倍数)平板个数;
n2 - 第二稀释度(高稀释倍数)平板个数;
d - 稀释因子(第一稀释度)。
北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台,并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站,自设设备及技术的微生物菌种保藏中心!欢迎广大客户来询!
更多
微生物种群鉴定测序(16S/18S/ITS)d的介绍与方法!
厂商
2024.08.27
人鼻粘膜上皮细胞的培养与处理方法及验收注意事项!
厂商
2024.08.27
白色绿僵菌的特点与培养及使用范围与保存方法!
厂商
2024.08.27
微生物在污水处理中的作用效果与主要方法有哪些?
厂商
2024.08.27