单细胞分离的特点应用以及小技巧

　　单细胞分离采用类似喷墨打印机以及一次性分配分离槽，温和高效地接种单细胞，使用明场高分辨率成像或可选荧光分选细胞，每个单细胞分离捕获 5张图像，单克隆性，提高工作效率，保持并增强细胞活率，且防止交叉污染。

　　采集单细胞分离的证据，在接种细胞时记录5张连续图像，以96或384孔板的形式提供直接的单克隆性图像证据，提高克隆形成率，与传统方法相比，在克隆形成率上可实现高达8倍的提升。

　　保持细胞健康和无菌，正如克隆生长实验所见，通过温和的分离维持细胞活性，并使用无菌的一次性单向分离槽防止交叉污染，简便、快速、可选择以及无损分离单细胞，简化遗传和克隆培养、分析中分离过程。快速高效接种单个活细胞至微孔板分离系统的主要功能为高效柔和地分离或分选活的单细胞。该系统通过微流控技术柔和地形成细胞液滴，同时利用白光和荧光成像实时分析细胞数量和荧光强度，将符合要求的单细胞液滴准确接种至96孔板。

　　主要特点
　　1.分离效率>85%，单细胞活率>75%；
　　2.记录分离前后的连续5张图像，用于支持细胞株的单克隆性；
　　3.采用一次性分离槽，省却系统的清洗验证，减小交叉污染的风险；
　　4.采用白光成像和荧光成像，可根据细胞直径、圆度以及荧光强度筛选出感兴趣的细胞；
　　5.内置除静电装置，消除微孔板静电，确保细胞液滴接种至微孔正中间，尤其是PCR板。

　　单细胞分离系统可代替传统的有限稀释法，高效地将单个活细胞接种至微孔板中。得益于分离系统的高效率和高活率，可以将每块微孔板中可获得的单克隆细胞团提高至多8块，从而在相同的工作量下可筛选更多的细胞克隆，从中发现更多更优质的细胞株。分离过程中记录的连续5张图像，可以与后续的孔板成像的图像证据互相补充，从而提高单克隆性的可信度。

　　应用范围：连接不同管径大小的毛细玻璃针，可分离捕获各种非贴壁状态的单细胞和微粒等，如细菌、酵母、藻类细胞、植物花粉、原生动物单细胞、悬浮细胞、血液细胞、免疫细胞、卵细胞、各种悬液中单细胞及特殊标记的单细胞等。

　　单细胞分离的小技巧
　　1. 缩短制备单细胞悬液的时间，以保留细胞活力
　　2. 考虑使用细胞筛来过滤出细胞团块或双细胞
　　3. 注意缓冲液的选择，包括分选和收集溶液
　　4. 如果您打算在分选后培养细胞，请使用对数生长期的细胞，并确定最佳培养条件
　　5. 在分选转染后的细胞时，通常在转染后72小时进行，以提高细胞群的生存能力
　　6. 如果采用荧光抗体来分离稀有细胞，请在染色前离心抗体，以便去除任何可能被误认为是靶细胞的荧光颗粒
　　7. 对于单细胞基因组学应用，在分选后别忘了离心平板，以确保细胞在孔的底部
　　8. 选择一种可靠的分析技术来评估分选细胞的数量和质量