冷冻干燥是一种相对温和的干燥过程,但是相比于一般药品,诊断试剂盒的冻干涉及到一些敏感的生物大分子,因而存在一定的风险。
基于ELISA和PCR方法的疾病诊断试剂盒中使用的试剂往往包含不稳定的成分,例如需要使用冷链运输的酶和抗体,因此,诊断试剂盒的稳定商用一直是个具有挑战性的问题。
生物分子诊断试剂的冻干
不同的分子对加工和储存条件表现出不同的敏感性,对生物大分子而言,不仅需要保证分子在冷冻干燥后的化学完整性,而且还必须保持其三维结构,来尽可能大的程度地减少由于聚集和变性等因素导致的活性下降。
小剂量诊断试剂
诊断试剂盒通常使用少量可以快速汽化的溶剂。尽管八连管中的几微升的蒸发量较少,但仍可以通过平板或微流体通道来加速蒸发。考虑到新冠疫情的紧迫性,检测试剂盒的产量和生产速度至关重要,因此许多新冠诊断试剂盒都采用96孔板,芯片或微流体芯片来进行生产。冻干机可以在很大程度上缓解这一困境。
生物分子的稳定性
尽管大多数生物分子(例如抗体和酶)对冷冻干燥的条件不敏感,但仍有些特例存在。对低温敏感的蛋白质可能会在冻干过程中发生聚集或沉淀,但是这种情况可以通过缓慢降温或添加表面活性剂来缓解。冻结浓缩效应可能会破坏某些成分,这一效应会随着pH值一同变化。磷酸盐缓冲液可能是造成这一效应的主要原因,更换pH缓冲液或快速冷却通常可以解决此问题。蛋白质也容易受到界面效应的影响,这一效应与冰晶表面积成比例。通常可以通过缓慢冷却或使用控制成核技术来增加晶体的尺寸并减小表面积来抵消这一效应的影响。脱水应力会影响蛋白质的稳定性。在某些情况下,需要结合水才可以保持蛋白质的结构。加入冷冻保护剂或冻干保护剂可以减轻这种情况,并通过固定蛋白质和/或模仿结构水的作用来避免脱水应力。
甘油效应
PCR试剂中甘油的存在(如图1)会造成严重的后果,因为它在常规的冷冻过程中不会凝固。如果溶液储备充足的情况下,可以通过加入溶液稀释甘油或添加赋形剂的方法来解决。但是,干饼(dried cake)中仍可能存在甘油,这会极大的影响稳定性和结构。新冠诊断试剂盒对于保质期的要求可能不如其他诊断试剂盒高,只需要几个月的保质期即可,因此也可以使用低温保存。这样的话,甘油的存在对活性成分的稳定性影响较小。
图1. PCR试剂中甘油的存在
容器和封装
冻干容器(例如小瓶、试管、孔板、芯片等)和封装的方式对热传递和热稳定性具有重大的影响。除了密封过程中实现完全无水的挑战之外,有些孔板对水的渗透性甚至大于封口(如图2)。Ward博士在Webinar中提到,在低氧气和低湿度条件下采用受控环境,并使用柔性隔离器可以降低产品中的水分含量。对于新冠检测而言,初始性能和快速生产可能比长期稳定性更重要,因此某些密封措施可能不是必要的。
图2 封盖相关过程图示
冷冻干燥设备
由于大多数相关企业都在提高新冠检测试剂盒的产量,而非其长期稳定性。因此中试型冻干机即可满足新冠检测试剂盒的生产需求。一个典型的代表,SP Scientific生产的中试冻干机Ultra,可以一批冻干多达5,000个2 mL的西林瓶。对于大多数检测试剂的生产而言,这样的产量足以满足需求。其他更大型的专为制药行业设计的生产型冻干机,还具有诊断试剂生产所需的其他功能,例如蒸汽灭菌等。
SP Scientific Ultra 中试和小批量冷冻干燥机
SP Ultra中试型冻干机具有较大的产品搁板面积和容积率,可以轻松处理每批次多达5,000个2mL西林瓶或144个96孔板。
SP Scientific Benchmark生产型冻干机
SP Benchmark生产型冻干机专为更大批量的诊断试剂产品的生产而设计。其拥有一个典型的圆形产品室和内部的冷凝器设计,可改善低塌陷温度的诊断试剂产品在极低的层板温度下干燥时蒸气输送。层板面积从2㎡到20㎡不等。
关于LyoStar
LyoStar 全自动冻干工艺开发与优化,具备全套完善的PAT工具,加快从配方开发到产品上市的速度。
LyoStar
-SMART™冻干工艺智能优化
-Controlyo®瞬时成核结晶技术
-LyoFlux®TDLAS水蒸气质量流实时监测
-TEMPRIS®无线温度测量
-基于QbD理论的全自动冻干工艺开发与优化
-缩短工艺时间,提高产品质量,加速产品上市
总结
以上所讨论的问题中,最重要的是需要根据所讨论分子的敏感性的不同,采用合适的冻干策略。同时还要考虑到其他对于诊断试剂的冻干要求。在进行新冠检测试剂的冻干中,试剂的体积通常较小,但批次数量较大,并且优先重点是产量而不是长期稳定性。因此,在设计专门用于新冠检测试剂盒的冻干方案时需要考虑这一点。
[来源:德祥科技有限公司]
版权与免责声明:
① 凡本网注明"来源:仪器信息网"的所有作品,版权均属于仪器信息网,未经本网授权不得转载、摘编或利用其它方式使用。已获本网授权的作品,应在授权范围内使用,并注明"来源:仪器信息网"。违者本网将追究相关法律责任。
② 本网凡注明"来源:xxx(非本网)"的作品,均转载自其它媒体,转载目的在于传递更多信息,并不代表本网赞同其观点和对其真实性负责,且不承担此类作品侵权行为的直接责任及连带责任。如其他媒体、网站或个人从本网下载使用,必须保留本网注明的"稿件来源",并自负版权等法律责任。
③ 如涉及作品内容、版权等问题,请在作品发表之日起两周内与本网联系,否则视为默认仪器信息网有权转载。
谢谢您的赞赏,您的鼓励是我前进的动力~
打赏失败了~
评论成功+4积分
评论成功,积分获取达到限制
投票成功~
投票失败了~