超临界流体色谱实战（二）丨迭加进样

摘要

制备工艺被广泛地应用于许多领域，如从新合成的化合物中选择性地筛选候选化合物或先导化合物，或用于对药物中的杂质、天然物质中具有特定功能的组分进行结构分析。制备型超临界流体色谱（简称制备SFC）具有分析时间短、后处理简单等优点，在医药工业和许多其他领域得到了广泛的应用。对于色谱峰数量有限的分析，如手性异构体的分离，“迭加进样”可以提高制备纯化的效率。本报告描述了一个使用Nexera UC 制备型超临界流体色谱仪的“迭加进样”功能来提高制备操作效率的实例。

关键词: 制备型SFC，迭加进样

1使用SFC以缩短分析时间

由于超临界二氧化碳的低粘度和高扩散系数，即使在高流速下，SFC的色谱柱压也很低。这意味着可以在不牺牲色谱柱效的情况下提高分析速度。因此，其分析时间比高效液相色谱法要短得多。   

以奥美拉唑的手性分离为例，使用制备LC和制备SFC所需时间的对比如图1所示，制备型SFC所用时间仅为制备型LC消耗时间的1/4，极大地提升了分析效率。

图.1 HPLC与SFC对奥美拉唑手性拆分的比较（制备型）

表1 分析条件

2迭加进样

“迭加进样”是一种标配于SIL-40自动进样器和FRS-40馏分收集器的连续进样技术，其利用色谱峰保留的时间间隔持续进样，从而节约分析时间提高分离效率，其工作原理如图2所示。在进行“迭加进样”设置时，需要特别注意以下几点：

• 仅适用于等度分析

• 色谱峰之间不会相互重叠

图.2 “迭加进样”工作原理

3“迭加进样”设置方法

“迭加进样”功能可以在LabSolutions工作站软件中轻松设定。通过设定“进样间隔”、“进样次数”和“等待下一次预处理的时间”等参数（图3），并使用单次运行结果（色谱图）模拟给定进样间隔的结果（图4），可以很容易地确认是否存在色谱峰重叠。若要连续进样，则必须设定适当的等待时间，以便样品从样品环（图5）中流出后，样品环可以切换回LOAD状态（图5的右侧）。 

图.3 设定“迭加进样”参数（用于图4）

图.4 “迭加进样”模拟结果 (LabSolutions)

图.5 样品阀动作 (FRS-40)

对于数据采集时间，输入一个大于单次分析时长且加上进样间隔和进样次数的乘积。例如，以0.8分钟的进样间隔连续进样9次，则输入值至少为单次分析时长加上7.2分钟（图6）。

图.6 数据采集时间 (SPD-M40)

在每次进样周期后将分馏阀返回其初始位置，则可以在同一瓶中收集相同的峰。因此，“迭加进样”方式可将同一化合物的所有峰收集在同一个收集瓶中。馏分收集将依据时间程序进行，仅需输入单次分析的时间程序，随后工作站即可以自动地根据进样间隔计算出馏分收集时间（图7和8）

图.7 “迭加进样”的复位时间

图.8 复位时间与制备间隔的关系

4“迭加进样”用于手性样品分离

以下介绍一个实际使用“迭加进样”分离手性药物的案例，样品为10mg/mL华法林溶液（甲醇）。分析条件如表2所示，所得色谱图如图9所示。结果表明，在10.5分钟的分析时间内，进样次数可由常规进样的3次增加到“迭加进样”的9次，极大提高了制备操作的效率。

表2 分析条件

图.9 华法林分离实例