顶空-GC-MS/MS法
测定动物类中药中
三甲胺含量
岛津挥发胺专用柱
SH-Volatil Amin
本文利用岛津三重四极杆气相色谱-质谱联用仪GCMS-TQ8050NX 结合AOC-6000顶空进样以及岛津挥发胺专用柱SH-Volatil Amin,建立了动物类中药中三甲胺的含量测定方法。
在0.1~10μg/mL浓度范围内三甲胺标准曲线线性关系良好, 线性相关系数0.9999。0.1μg/mL标准溶液连续进样6针,峰面积RSD为6.40%。加标回收实验中,加标浓度为50和500mg/kg,平均加标回收率为98.43%和95.64%,对应RSD分别为9.10%和 2.06%。此方法可为动物类中药中三甲胺定量分析提供参考,同时也为动物类中药中腥臭气味来源研究提供思路。
技术特点
1. 创新性样品制备方法,有效消除三甲胺易挥发性对实验结果准确度的影响。
2. 顶空进样结合GC-MS/MS测定,有效抑制了基质化学干扰,保证结果可靠性。
3. 碱改性SH-Volatil Amin有效提升了对三甲胺的惰性,改善峰形及分析稳定性。
三甲胺(Trimethylamine, TMA)是一种带腥臭气味的挥发性有机物,广泛存在于肉类和海鲜等动物源性食品中。其主要来源于动物体内一种蛋白质稳定剂氧化三甲胺(Trimethyamine Oxide, TMAO)的酶促反应,是判断动物源性食物新鲜度的重要指标。
动物类中药源自动物全体、器官、组织或加工制品, 其主要成分为蛋白、多肽类, 在临床应用中疗效确切。但药物腥臭气突出, 例如中医临床常用的地龙、水蛭、美洲大镰、鸡内金等均有明显腥臭气。TMA已被证实是动物类中药腥臭气味的相同关键气味物质之一,患者服药顺应性对药物中三甲胺含量提出了要求,因此需要开发用于动物类中药中三甲胺含量测定的方法。
目前食品中三甲胺含量测定方法较为成熟,并建立了国家标准 GB 5009.179-2016《食品安全国家标准 食品中三甲胺的测定》,但该检测方法容易受到三甲胺易挥发性和高吸附性干扰,影响实验结果稳定性和重现性。
本文利用岛津GC-MS/MS 结合AOC-6000顶空进样以及岛津挥发胺专用柱SH-Volatil Amin,采用独特样品制备方法,建立了动物类中药中三甲胺含量测定方法,并测定了地龙、水蛭和美洲大镰等实际样品中三甲胺含量。该方法灵敏度高,结果可靠,重现性良好,可为动物类中药中三甲胺检测提供参考。
实验部分
1.1 仪器
GCMS-TQ8050NX三重四极杆气相色谱-质谱联用仪
AOC-6000自动进样器
1.2 分析条件
顶空参数:
恒温炉温度:80 ℃
顶空针温度:100 ℃
平衡时间:30 min
GC-MS/MS参数:
色谱柱:SH-Volatil Amin, 30 m x 0.32 mm x 5.0 μm, P/N:R227-36326-01
柱温程序:40 ℃(0.5min)_20 ℃/min_200℃(5 min)
进样量:1 mL
进样方式:分流进样
分流比:10:1
进样口温度:200 ℃
载气控制方式:恒流模式
柱流量:2 mL/min
离子化方式:EI
离子源温度: 200 ℃
色谱质谱接口温度 : 230 ℃
检测器电压:调谐电压+0.5kV
采集模式:MRM,离子对信息见表1
样品前处理
结果与讨论
3.1 三甲胺标准溶液谱图
3.2 标准曲线和质量色谱图
使用5%三氯乙酸溶液配制三甲胺盐酸盐标准溶液系列, 浓度分别为0.1、0.5、1.0、2.0、5.0和10.0μg/mL(以三甲胺计),精密量取各浓度标准溶液2mL分别置于预制好的顶空瓶石蜡层上部,压盖密封后,进 GC-MS/MS分析。以三甲胺浓度为横坐标,三甲胺定量离子对峰面积为纵坐标作标准曲线,标准曲线如图2 所示,线性相关系数如表2所示,三甲胺质量色谱图见图3。
3.3 重复性实验及检出限
取三甲胺盐酸盐标准溶液(以三甲胺计,0.1μg/mL) 2mL置于预制好的顶空瓶石蜡层上部,平行制备样品6份并连续进样,用于考察三甲胺峰面积的重复性,测定结果见表3。以3倍信噪比(峰至峰)计算检出限,三甲胺仪器检出限见表2。
3.4 加标回收率
三甲胺是动物类中药中内源性化合物,同时由于三甲胺的易挥发性,在本实验中,选择三甲胺盐酸盐标准溶液进行加标回收实验。美洲大镰中加标浓度分别为50和500mg/kg,按照前ER每个加标浓度平行制备3份加标样品,考察回收率和RSD。50mg/kg加标水平下,加标回收率分布在88.08%-103.63% 之间,RSD为 9.10%;500 mg/kg加标水平下,加标回收率分布在93.39%-97.08%之间,RSD为2.06%;详细结果见表4。
3.5 实际样品分析结果
选取产地不同的地龙、美洲大镰和水蛭为样品,按前述样品处理流程进行样品制备,并采用上述仪器条件测定,三甲胺检测结果如表5所示。
结论
本方法采用岛津GCMS-TQ8050NX结合AOC-6000 顶空进样以及岛津挥发胺专用柱SH-Volatil Amin,建立了动物类中药中三甲胺含量测定方法,并测定3种动物类中药样品中三甲胺含量。在0.1~10 μg/mL浓度范围内,三甲胺标准曲线线性相关系数0.9999;根据0.1μg/mL三甲胺标样数据,以3倍信噪比(峰至峰)计算仪器检出限为0.63 μg/L;在重复性实验中,浓度为0.1 μg/mL三甲胺标准溶液连续进样6针,峰面积RSD为6.40%;在50mg/kg和500 mg/kg加标水平下,平均加标回收率为98.43%和95.64%。实验结果表明:该方法采用GC-MS/MS多反应监测模式结合独特样品前处理方式,灵敏度高,结果准确,重现性良好,能够有效监测动物类中药中三甲胺含量。
小贴士
含-NH-的化合物容易和色谱柱熔融石英表面-Si-OH形成分子间氢键,容易导致色谱峰拖尾和柱上吸附,影响胺类分析结果准确性和重现性。
方法选择:对于甲胺、二甲胺、三甲胺检测一方面可以考虑离子色谱,另一方面可以考虑气相色谱,分析挥发胺相对更简单快速。
GC柱选择:如使用常规色谱柱,建议增大膜厚以改善对胺类惰性,但吸附问题无法彻底消除,因此更建议碱改性挥发胺专用柱,一方面通过碱改性真实提升对胺类惰性,另一方面高膜厚增加了对挥发胺保留,从而有效分离挥发胺。
产品询价
胺类专用柱
SH-Volatil Amin
更多
残留溶剂专题②|岛津SH-I-624Sil MS助力高效分析
厂商
2024.08.27
酒驾新国标|顶空气相色谱法测定血液中甲醇、乙醇、正丙醇、异丙醇、丙酮和正丁醇含量
厂商
2024.08.27
吃货太难|HS-GCMS法测定食品接触材料及制品中25种溶剂残留
厂商
2024.08.27
赛况聚焦|第四届药斯卡争霸赛半期优秀作品
厂商
2024.08.27