海能仪器：凯氏定氮法测定饲料中蛋白氮的含量

1  前言

饲料作为畜牧养殖生产中的重要生产资料，其营养价值的高低直接影响到畜牧养殖的效益，而饲料中蛋白质的含量是一项重要的指标，饲料中粗蛋白质包括蛋白氮和非蛋白氮两部分，后者主要包括硝酸盐、铵盐等，故不能反映出饲料蛋白质对动物的真正营养价值。有些不法生产商故意添加硫酸铵、尿素等非蛋白质来提高产品的粗蛋白含量，导致部分养殖场户存在一个误区，认为标签上标注的粗蛋白质高，营养价值就高，从而造成养殖效益的低下。本文在凯氏定氮方法的基础上进行相应的前处理从而达到测定真蛋白的目的。

蛋白质经沸水提取并在一定碱性条件下，能与硫酸铜发生盐析作用而析出沉淀，此沉淀物不溶于热水，而非蛋白氮则易溶于水，用热水洗沉淀，将水溶性含氮物洗去，剩下的沉淀物再用凯氏定氮法测定，得出真蛋白质的含量。

2  实验部分

2.1 仪器与试剂

粉碎机、40目分样筛、分析天平（感量0.1mg）、烧杯250ml、玻璃棒、漏斗(直径10cm)、定性滤纸（中速，12.5cm，15cm)、可控温干燥箱、K1100F全自动凯氏定氮仪、SH420F石墨消解炉、可控温电炉

浓硫酸（98%）、硫酸铜(分析纯)、硫酸铜溶液(10%)、硫酸钾、氢氧化钠溶液（40%）、氢氧化钠溶液（2.5%）、硼酸（20g/L，按混合指示剂：硼酸=1:100加入指示剂）、甲基红-溴甲酚绿混合指示剂(1:5)、硫酸标准溶液（C（1/2H₂SO₄=0.1011mol/L)、氯化钡溶液（5%）

2.2 实验方法

2.2.1 前处理

将风干饲料样品用饲料样品粉碎机粉碎，通过40目（孔径0.45 mm）筛，制得分析饲料样本，备用。

准确称取约0.5g试样（精确至0.000 1 g）置于250 mL烧杯中，加75mL蒸馏水，加热至沸煮沸30min，加入2.5 %氢氧化钠溶液20 mL，10 %硫酸铜溶液20 mL，用玻璃棒充分搅拌均匀，微沸一段时间，冷却放置超过2 h。用定性滤纸过滤，然后用70~80 ℃热水冲洗沉淀5次以上，用 5%氯化钡溶液5滴和数滴盐酸检查滤液，直至不生成白色硫酸钡沉淀。将沉淀和滤纸放在65 ℃烘箱烘干。（共称取9个样品，4-9经上述沉淀处理，8号样品添加0.0636g尿素，9号样品添加0.1135g硫酸铵；1-3号样品不做沉淀处理直接消化）

2.2.2 消解

将干燥后的沉淀连同滤纸一起放入消化管中，加入15mL浓硫酸，3g硫酸钾，0.2g硫酸铜，放在石墨消解炉上设置温度梯度升温消化（同时做空白试验）。

升温程序：

消解完成后，冷却，待上机。

2.2.3 测试

将冷却后的消化管置于K1100F全自动凯氏定氮仪上，设置参数：硼酸20mL，碱 60mL，稀释水10mL，蒸馏5min。依次做空白及样品，结果自动计算，打印。