2018/08/20 15:57
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维生素K1是在天然绿色植物中广泛存在的一种脂溶性维生素,是肝脏合成因子Ⅱ、Ⅶ、Ⅸ、Ⅹ所必须的物质。缺乏维生素K1会引起出血性疾病。因此要多吃蔬菜水果哦!
下面看看月旭科技对食品中的维生素K1的检测过程及结果。
适用范围及原理
水果、蔬菜等低脂性植物样品,用异丙醇和正己烷提取其中的维生素K1,经维生素K1前处理小柱净化,去除叶绿素等干扰物质。用C18液相色谱柱将维生素K1与其他杂质分离,锌柱柱后还原,荧光检测器检测,外标法定量。(本实验选用菠菜和苹果)
参考标准:《GB 5009.158-2016 食品安全国家标准 食品中维生素K1的测定》
溶液的配置
维生素K1标准贮备溶液(1mg/mL):精确称取50mg(精确至0.1mg)维生素K1标准品于50mL容量瓶中,用甲醇溶解并定容至刻度。将溶液转移至棕色玻璃容器中。在-20℃下避光保存,保存期2个月。
维生素K1标准中间液(100µg/mL):准确吸取标准贮备溶液10.00m于100mL容量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀。将溶液转移至棕色玻璃容器中,在-20℃下避光保存,保存期2个月。
维生素K1标准使用液(1.00µg/mL):准确吸取标准中间液1.00mL于100mL容量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀。
正己烷-乙酸乙酯混合液(90+10):量取90mL正己烷,加入10mL乙酸乙酯,混匀。
流动相:量取甲醇900mL,四氢呋喃100mL,冰乙酸0.3mL,混匀后,加入氯化锌1.5g,无水乙酸钠0.5g ,超声溶解后,用0.22µm有机系滤膜过滤。
提取步骤
精确称取5g经均质匀浆的样品于50mL离心管中,加入5mL异丙醇,旋涡1min,超声5min,再加入10mL正己烷,旋涡震荡提取3min,6000r/min离心5min,移取上清液至25mL棕色容量瓶中,向下层溶液中加入10mL正己烷,重复提取1次,合并上清液于上述容量瓶中,正己烷定容至刻度。用移液管准确移取上清液5mL至15mL离心管中,氮气轻吹至干,加入1mL正己烷溶解,待净化。
SPE净化步骤
SPE柱:月旭Welchrom® 维生素K1前处理小柱
规格:2g/6mL
活化:5mL正己烷,弃去
上样:待净化液全部上样,弃去
淋洗:5mL正己烷淋洗,弃去
洗脱:15mL正己烷-乙酸乙酯混合液洗脱,收集于50mL离心管中,抽干氮吹至近干,用甲醇定容至5mL,并过0.22µm滤膜,上HPLC检测。
色谱条件
色谱柱:
月旭Ultimate® XB C18 4.6×250mm,5µm
Ultimate® Zn 4.6×50mm
流动相:甲醇900mL,四氢呋喃100mL,冰乙酸0.3mL,混匀后,加入氯化锌1.5g ,无水乙酸钠 0.5g
流速:1.0mL/min
柱温:30℃
进样量:10µL
检测波长:激发波长为243nm,发射波长为430nm
色谱图或者加标回收率结果
图1 维生素K1对照10ng/mL
图2 苹果样+标0.05µg/g
图3 苹果原样
图3 苹果原样
图5 菠菜原样
表1 加标回收率
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