创新赋能 | 赛默飞助力特医食品中多种维生素分析

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飞飞 赛默飞色谱与质谱中国

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吴燕娇 冉良骥

特殊医学用途配方食品（foods for special medical purpose, FSMP），简称特医食品。我国特医食品行业由于起步较晚，目前规模相对较小，但是近年来呈现出良好的发展态势，截至2024年7月1日，共有192款特医食品获批，第一季度与第二季度分别新增特医食品17款与11款。食品安全国家标准特殊医学用途配方食品通则中明确规定多种维生素含量。其中维生素A和D是人体生长发育的必需物质，尤其对胎儿、婴幼儿的发育，上皮组织的完整性，视力，生殖器官，血钙和磷的恒定，骨骼、牙的生长发育有重要作用。维生素E是一种优良的天然抗氧化剂，能抑制不饱和脂肪酸的氧化，减少过氧化脂质的形成以及对机体生物膜的损害，有抗衰老、抗癌及防止动脉粥样硬化作用 [1]。

目前有关配方食品中，维生素 ADE 的测定方法较多，其中操 作步骤中对于脂溶性维生素基本都要经过皂化、提取、洗涤、 浓缩等复杂的前处理步骤，并且无法实现一个方法完成以上几 种维生素的同时测定。赛默飞液相团队从 2010 年开始尝试利 用特色的双三元液相系统，结合二维色谱实现维生素 A、维生素 D2、D3 以及维生素 E 四种同分异构体的同时测定，前后共推出六代方法对该方案进行不断优化。本文在先前研究的[2]基础上，通过优化模块配置、流动相组成、色谱柱型号、方法梯度等，提高了方法稳定性以及几种维生素的分离度，并在二维色谱的基础上，通过增加在线固相萃取的设定，将传统的人工液液萃取、洗涤和干燥浓缩等步骤同时转移到仪器自动完成， 大大简化了前处理过程，减少有机溶剂的使用以及与实验人员的接触，使整个实验更加环保，大大降低实验成本的同时也提高了实验的安全性。

实验部分

仪器：ThermoFisher Vanquish Core 高效液相色谱仪 SPE 泵：Vanquish Quaternary Pump （VC-P20-A-01） 一维、二维泵：Vanquish Dual Pump (VC-P33-A-01) 自动进样器：Vanquish sampler CT （VC-A12-A-02, 100μL 定 量环） 柱温箱：Vanquish Column Compartment C（VC-C10-A-03， 含两个 2p-6p 切换阀） 检测器：Variable Wavelength Detector C（VC-D40-A-01, 含11μL流通池） Vanquish Diode Array Detector HL （VH-D10-A, 含 60mm 流通池）

色谱软件：Chromeleon Chromatography Data System7.3.1

样品前处理及标准品溶液制备：参考AN_24019_HPLC 在线固相萃取联用二维液相色谱测定食品中维生素 A、D、E及异构体含量

在线固相萃取-二维液相色谱法测定

在线固相萃取-二维液相色谱（Online SPE-2D-LC）系统连接见图1所示

（1D, 第一维; 2D, 第二维; SPE, 在线固相萃取柱;  Trap, 捕集柱）

实验结果与讨论：

对照品和样品溶液谱图

维生素A、维生素E四个同分异构体和维生素D2、维生素D3对照品和样品溶液一维和二维分析谱图见图2-a、b、c。

图2a  维生素A对照品及样品一维325 nm谱图（上图为对照品，下图为样品）（点击查看大图）

图2b  维生素E对照品及样品一维294 nm谱图（上图为样品，下图为对照品）（点击查看大图）

图2c  维生素D对照品及样品一维 264 nm谱图（上图为对照品，下图为样品）（点击查看大图）

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线性及灵敏度

按照表1标准曲线浓度配置溶液，分别进样100μ­L，以浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，考察方法的线性范围及定量限。结果显示，各维生素在其浓度范围内线性良好，相关系数均＞0.999。方法灵敏度较高，满足标准要求，方法线性及检测限（S/N＞3）结果见表3，标准曲线见图3，最低浓度的分离图谱见图5。

表3 方法线性及灵敏度

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精密度

采用7#浓度标准品混合溶液连续进样6针考察精密度。结果如表4所示，6针样品各峰的峰面积RSD%均小于0.31%，满足方法要求，体现Vanquish Core液相色谱良好的稳定性和重现性。见表4。

表4 样品连续进样结果（n=6）

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回收率

取一定量的样品，加入适量的标准液，按照2.5.2前处理后，分别测定维生素ADE的含量，计算出样品与标准浓度扣除样品浓度后的加标回收率。见表5。

表5 回收实验结果（n=6）

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样品测试结果

采用上述方法对市售配方奶粉和特殊医学配方食品样品进行测试，结果如表6显示，样品基质对目标维生素测试无干扰，表明方法适合不同食品中维生素A、D、E含量的测定。

表6 样品测试结果

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结论

本文采用赛默飞Vanquish Core液相色谱，在前期数代二维液相色谱同时测定食品中维生素A、D、E方案基础上，建立了一种皂化液直接稀释上样，测定维生素A、维生素D2、D3以及维生素E四种同分异构体的方法。该方法采用全自动在线SPE结合中心切割二维液相色谱取代传统的液液萃取和进一步纯化，简化了样品的整个分析工作流程。方法学实验结果表明本方法灵敏度、线性、重现性及准确度均良好。实验简化样品前处理过程，缩短样品分析周期，大幅提高了分析效率及降低实验成本。利用赛默飞独特的双三元液相，模块搭建更紧凑，一套液相的台面占地可以完成多套液相的测试工作，为企业节省了空间及时间成本。

参考文献：

[1] 宋前流，陈群. 用药护理. 北京. 人民军医出版社. 2014. 353-355页

[2] AN_20071_HPLC. 在线固相萃取-二维液相色谱法分析配方奶粉中的维生素A、D和E异构体含量. 

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