PBCV DNA连接酶

PBCV DNA连接酶

商品属性：

 产品介绍：

描述： PBCV DNA 连 接酶 也称为 SplintR 连接酶 或 Chorella 病毒 DNA 连接酶，它能够高效催化相邻的 DNA 核苷酸的连接，这个连接过程需要一条互补的 RNA 在两条 DNA 单链间起“夹板”或“桥梁”的固定作用。PBCV DNA 连接 酶的这种活性远远优于传统的 T4 DNA 连接酶，有助于 miRNAs 和 mRNAs，包括 SNPs 在内的研究方法的创新。 另外，在二代测序和分子诊断等众多领域中，PBCV DNA 连接酶是富集目的基因的理想选择。它具有稳定的生物活 性，对 RNA 介导固定的 DNA 底物亲和性强（米氏常数 Km = 1 nM），能够在复杂的混合物中检测到亚纳摩尔级的特 定 RNA。因此，在 RNA 检测技术中，PBCV DNA 连接酶 不失为最佳选择用酶。

储存：-20℃可保存 2 年。
10×PBCV Ligase Buffer：500 mM Tris-HCl, pH 7.5, 50 mM
MgCl2, 25 mM DTT, 5 mM ATP.
活性定义：25°C 反应 30 分钟条件下，使 1pmol 的
DNA:RNA 杂交底物连接所需要的酶量定义为 1Unit。
反应温度及失活该酶的最佳反应温度为 25°C，可在 16-37°C 之间优化，37℃可明显提高反应的特异性；该酶在 65°C 加热 20min 即可失活。

操作方法：

1. 连接反应
连接底物（1 μM） 2 μl
10×PBCV Ligase Buffer 2 μl
PBCV DNA Ligase(25 U/μl) 1 μl
 灭菌水 up to 20 μl
25°C 反应 15-60min。
2. 65°C 加热 20min，使酶失活。

注意事项：

1.该酶对一价阳离子非常敏感，如 NaCl 或 KCl 的浓度应低于 50 mM。
2. 该酶的反应温度为16~37°C，最佳温度为25℃。
3. 连接效率随着夹板 RNA 长度的减少而降低，当长度小于等于 10nt 时，连接效率为零。 

pcr相关试剂实验结果分析：

PCR实验结果的分析涉及多个方面，‌包括实验操作、‌试剂质量、‌实验条件等，‌这些因素都会影响PCR实验的成功率和结果的准确性。‌以下是对PCR实验结果分析的一些关键点：‌

循环次数过多：‌增加模板量减少循环次数，‌缩短退火时间及延伸时间，‌或改用两种温度的PCR循环，‌可以有效避免循环次数过多导致的问题。‌

退火温度过低：‌退火温度的适当调整对于PCR反应的成功至关重要，‌过低的退火温度可能导致非特异性扩增，‌影响结果的准确性1。‌

电泳体系问题：‌包括凝胶中缓冲液和电泳缓冲液浓度相差太大、‌凝胶没有凝固好、‌琼脂糖质量差等问题，‌这些都会影响DNA片段的分离效果。‌

试剂盒问题：‌运输储存不当可能引起试剂盒失效，‌试剂盒本身质量问题如引物选择、‌循环参数设置不当也可能导致实验失败1。‌

降解的陈旧模板：‌使用降解的陈旧模板进行扩增容易产生涂布，‌影响结果的解读1。‌

PCR假阴性结果：‌可能由引物长度不够、‌试剂浓度不标准、‌靶序列突变或缺失、‌循环参数设置错误、‌标本中有Taq酶抑制剂、‌PCR产物检测系统灵敏度不够等因素引起。‌

为了获得准确的PCR实验结果，‌需要注意以下几点：‌

确保PCR反应体系中各种试剂的配比和操作步骤的精准度。‌

在PCR反应过程中需要对PCR产物进行实时监测，‌以便及时对反应条件进行调整。‌

防止样本的污染和交叉感染，‌以免影响PCR反应的准确性和可靠性。‌

通过上述分析，‌可以更好地理解和控制PCR实验中的关键因素，‌从而提高实验结果的准确性和可靠性。‌

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