产品名称:BCA 蛋白定量试剂盒
BCA法蛋白定量试剂盒检测原理是,在碱性条件下,蛋白质将Cu2+还原为Cu+, Cu+与BCA试剂相互作用,两分子的BCA螯合一个铜离子,形成紫颜色的络合物,该复合物为水溶性,其在562nm处有强吸光性,在一定浓度范围内,吸光度与蛋白质含量呈良好的线性关系。 通过测定562nm的吸收值,并与标准曲线对比,即可计算待测蛋白的浓度。 BCA法是目前实验室应用最广泛的蛋白质浓度测定方法,BCA 法快速灵敏、稳定可靠,对不同种类蛋白质检测的变异系数非常小。 BCA 法测定蛋白浓度不受绝大部分样品中的化学物质的影响。在组织细胞蛋白提取过程中,常用浓度的去垢剂SDS,Triton X-100,Tween不影响检测结果,但受螯合剂(EDTA,EGTA)、还原剂(DTT,巯基乙醇)和脂类的影响。 本试剂盒采用牛血清白蛋白(BSA)溶液作为蛋白质标准品溶液。 本试剂盒最小检测蛋白量可达0.2μg,检测浓度下限达到10μg/mL。 本试剂盒测定范围为20~2000 μg/ml,在此范围内有较好的线性。
BCA 蛋白定量试剂盒,使用注意事项
1.Bradford法对于去污剂敏感的,受高浓度去垢剂影响。需确保SDS低于0.1%,Triton X-100低于0.1%,Tween 20,60, 80低于0.06%。含去垢剂的样品推荐使用BestBio贝博的BCA蛋白浓度测定试剂盒。
2.染色液使用前请混匀。
3.将G250染色液放置到室温再使用,有利于提高检测的灵敏度。
BCA 蛋白定量试剂盒,操作方法
A. 96孔酶标板测定:
1. 蛋白标准工作液配制:
根据样品数量配制相应体积的蛋白标准工作液。将蛋白标准储存液用双蒸水5倍稀释,配成1mg/ml的工作液。
2. 标准曲线绘制。
取一块酶标板,按以下表格数据加入试剂:
3. 振荡混匀后,室温放置5-10分钟。
4. 用酶标仪测定A595,以不含BSA的光吸收值为空白对照。
5. 以蛋白含量(g)为横坐标,吸光值为纵坐标,绘出标准曲线。
6. 样品测定:
将待测蛋白样品用纯水稀释至适当浓度,取10l样品,加入100l 2x Bradford染色液和90l的纯水,混匀后放置5-10分钟,然后以0号孔为对照,测定样品吸收值A595。
【注】:
必须用纯水补足体积,不能用PBS等buffer。
7. 根据测得的吸收值,在标准曲线上即可查得样品的蛋白含量。
8. 计算蛋白浓度:
以查得的蛋白含量除以样品体积10l,再乘以相应的稀释倍数即可得到待测样品的实际浓度。
B. 比色皿测定
按照比色皿规格,与以上方法相同,适当按比例增加各溶液体积即可。
BCA 蛋白定量试剂盒,试剂准备
1.纯水 2.生理盐水
BCA 蛋白定量试剂盒,注意事项
1.蛋白标准品注意防止微生物污染。避免反复冻融。
2.可以根据需要将蛋白标准分装后冻存。
3.试剂拆封后请尽快使用完!
保存温度2-8℃
保质期1年
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3512-100ml | 100ml | 180 | 封闭液(Western) |
3513-100ml | 100ml | 180 | 洗涤液(Western) |
3514-100ml | 100ml | 180 | 一抗稀释液(Western) |
3515-100ml | 100ml | 180 | 二抗稀释液(Western) |
3516-100ml | 100ml | 180 | 抗体去除液(Western) |
3517-100ml | 100ml | 180 | 蛋白印迹膜再生液( Stripping Buffer) |
3521-100ml | 100ml | 180 | 丽春红染色液 |
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3531-50ml | 50ml | 225 | 蛋白提取液(Western) |
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3542-100ml | 100ml | 180 | ELISA包被缓冲液(1×) |
3543-100ml | 100ml | 225 | ELISA包被缓冲液(10×) |
3544-100ml | 100ml | 180 | ELISA终止液 |
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35454-500ml | 500ml | 225 | 10×TBS(pH8.0,Tris缓冲盐溶液) |
35455-500ml | 500ml | 240 | 20×TBS(pH7.4,Tris缓冲盐溶液) |
35456-500ml | 500ml | 240 | 20×TBS(pH7.5,Tris缓冲盐溶液) |
35457-500ml | 500ml | 240 | 20×TBS(pH8.0,Tris缓冲盐溶液) |
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35459-500ml | 500ml | 255 | 10×TBST(pH7.5,TBS溶液/Tween20) |
35460-500ml | 500ml | 255 | 10×TBST(pH8.0,TBS溶液/Tween20) |
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35462-500ml | 500ml | 270 | 20×TBST(pH7.5,TBS溶液/Tween20) |
35463-500ml | 500ml | 270 | 20×TBST(pH8.0,TBS溶液/Tween20) |
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