核酸外切酶I(Exonuclease I)具有从3’-5’方向降解单链 DNA 的外切酶活性,能够逐步释放脱氧核糖核酸5'单磷酸,并留下完整的5'端二核苷酸。该酶来源于携带有E. coli exo I 基因的质粒,经重组表达纯化而得。Exonuclease I多用于PCR扩增后降解消化引物,该酶对于双链DNA和磷酰或乙酰基团封闭的3’OH末端DNA链无活性。
单位定义
1 单位指在 37℃ 条件下,30 分钟内催化释放 10 nmol 的酸溶性核苷释放所需要的酶量。
应用
从PCR混合物中去除引物
PCR产物测序之前用于在单管中使用大引物进行的PCR诱变反应
从核酸混合物中去除含有3'羟基末端的单链DNA
检测含有3'羟基末端的单链DNA的存在
储存
置于-20°C,可保存3年。
使用注意事项
(1)1×ExoI Buffer:67mM Glycine-KOH pH 9.5,6.7mM MgCl2,10mM 2-巯基乙醇。该酶在常规PCR Buffer中也具有活性。
(2)该酶的最佳反应温度为37°C,80°C 20min可失活。
(3)该酶不能切割双链DNA,因此含有二级结构的单链DNA需要变性后才能完全消化。
应用实例1:在以A3824-03或 A3828-03,用 LP1002引物组进行的LAMP测试。Bst4.0 SYBR Green试剂可在标准定量PCR仪或恒温荧光仪上进行反应。以体外转录RNA为模板,1-6分别为1、10、100、1000、10e4和10e6Copies,NTC为ddH2O为模板。下图为65℃反应25min的检测结果,可以看到检测反应<20min(达平台期)。
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应用实例2: 用 LP1002引物组进行的LAMP测试。OG变色法为终点变色策略,在反应结束后,倒置反应管,溶解管盖上染料后,阳性样本呈现出醒目的绿色,阴性表现出橙色,区分明显。且该方法不受样本类型限制,杂质耐受性很好。以体外转录RNA为模板,1-6分别为1、10、100、1000、10e4和10e6Copies,NTC为ddH2O为模板。下图为65℃反应20min后检测结果。
![](https://img1.17img.cn/17img/images/202408/uepic/1ab7e4d0-ee4e-4ac0-a331-5e5047ebd645.jpg)
应用实例3:采用荧光酶活测定法在30℃和60℃条件下测定HotStart Bst 4.2,结果显示与未加入Aptamer的对照比较来看。HotStart Bst 4.2在30℃条件下酶活几乎无活性,而60℃条件下1min内酶活完全释放,恢复100%活性
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