4 DNA聚合酶是来源于T4噬菌体的DNA聚合酶,又名T4 gp43,在T4噬菌体DNA复制过程中引导先导链和滞后链沿5'-3'方向延伸。通过对第219个氨基酸进行点突变修饰D219A,使得该酶失去 3'-5' 外切核酸酶的活性,但保留了聚合酶活性,且该酶的聚合酶活性强于DNA 聚合酶 I。 与 DNA 聚合酶 I 不同,T4 DNA 聚合酶不具有 5'-3' 核酸外切酶活性。
性定义
一个活力单位即在37°C条件下,30分钟内催化10 nmol dNTP的掺入反应成为酸不溶性物质所需的酶量。
储存
-20℃可保存3年。
10X T4 DNA Pol Buffer
200 mM Tris-HCl,pH7.9
500 mM NaCl
100 mM MgCl2
5 mM DTT
1 mg/ml BSA
热失活
75°C, 20 min
1X Sau Reaction Buffer
50 mM NaCl ,10 mM Tris-HCl (Ph7.5) , 10 mM MgCl2 , 1 mM DTT。
储存
-20℃可保存2年,避免反复冻融。
热失活
75°C,20min。
应用实例1:在以A3824-03或 A3828-03,用 LP1002引物组进行的LAMP测试。Bst4.0 SYBR Green试剂可在标准定量PCR仪或恒温荧光仪上进行反应。以体外转录RNA为模板,1-6分别为1、10、100、1000、10e4和10e6Copies,NTC为ddH2O为模板。下图为65℃反应25min的检测结果,可以看到检测反应<20min(达平台期)。
![](https://img1.17img.cn/17img/images/202408/uepic/dc60417d-148e-413c-87cc-676bd5a3d7e1.jpg)
应用实例2: 用 LP1002引物组进行的LAMP测试。OG变色法为终点变色策略,在反应结束后,倒置反应管,溶解管盖上染料后,阳性样本呈现出醒目的绿色,阴性表现出橙色,区分明显。且该方法不受样本类型限制,杂质耐受性很好。以体外转录RNA为模板,1-6分别为1、10、100、1000、10e4和10e6Copies,NTC为ddH2O为模板。下图为65℃反应20min后检测结果。
![](https://img1.17img.cn/17img/images/202408/uepic/1ab7e4d0-ee4e-4ac0-a331-5e5047ebd645.jpg)
应用实例3:采用荧光酶活测定法在30℃和60℃条件下测定HotStart Bst 4.2,结果显示与未加入Aptamer的对照比较来看。HotStart Bst 4.2在30℃条件下酶活几乎无活性,而60℃条件下1min内酶活完全释放,恢复100%活性
![](https://img1.17img.cn/17img/images/202408/uepic/8dc01f70-54d3-4033-9cef-16f757dacbab.jpg)
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