Hi T7 RNA聚合酶

4 DNA聚合酶是来源于T4噬菌体的DNA聚合酶，又名T4 gp43，在T4噬菌体DNA复制过程中引导先导链和滞后链沿5'-3'方向延伸。通过对第219个氨基酸进行点突变修饰D219A，使得该酶失去 3'-5' 外切核酸酶的活性，但保留了聚合酶活性，且该酶的聚合酶活性强于DNA 聚合酶 I。 与 DNA 聚合酶 I 不同，T4 DNA 聚合酶不具有 5'-3' 核酸外切酶活性。

性定义

一个活力单位即在37°C条件下，30分钟内催化10 nmol dNTP的掺入反应成为酸不溶性物质所需的酶量。

储存

-20℃可保存3年。

10X T4 DNA Pol Buffer

200 mM Tris-HCl，pH7.9

500 mM NaCl

100 mM MgCl2

5 mM DTT

1 mg/ml BSA

热失活

75°C， 20 min

1X Sau Reaction Buffer

50 mM NaCl ，10 mM Tris-HCl (Ph7.5) , 10 mM MgCl2 , 1 mM DTT。

储存

-20℃可保存2年，避免反复冻融。

热失活

75°C，20min。

应用实例1：在以A3824-03或 A3828-03，用 LP1002引物组进行的LAMP测试。Bst4.0 SYBR Green试剂可在标准定量PCR仪或恒温荧光仪上进行反应。以体外转录RNA为模板，1-6分别为1、10、100、1000、10e4和10e6Copies，NTC为ddH2O为模板。下图为65℃反应25min的检测结果，可以看到检测反应<20min(达平台期)。

应用实例2： 用 LP1002引物组进行的LAMP测试。OG变色法为终点变色策略，在反应结束后，倒置反应管，溶解管盖上染料后，阳性样本呈现出醒目的绿色，阴性表现出橙色，区分明显。且该方法不受样本类型限制，杂质耐受性很好。以体外转录RNA为模板，1-6分别为1、10、100、1000、10e4和10e6Copies，NTC为ddH2O为模板。下图为65℃反应20min后检测结果。

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应用实例3：采用荧光酶活测定法在30℃和60℃条件下测定HotStart Bst 4.2，结果显示与未加入Aptamer的对照比较来看。HotStart Bst 4.2在30℃条件下酶活几乎无活性，而60℃条件下1min内酶活完全释放，恢复100%活性