蛋白L(Protein L)是从大型消化链球菌(Peptostreptococcus magnus)中分离得到的一种多结构域细胞壁蛋白,与抗体的kappa轻链的可变区域相互作用,特别是K1、K3和K4轻链,使其能够与大约67%的人免疫球蛋白和99%的小鼠免疫球蛋白结合[1]。
Diamond Protein L是将Protein L配基同高刚性琼脂糖基架偶联后制成的一种新型亲和层析介质。相较于常规介质,高刚性琼脂糖基架流速更快,反压更低。Protein L配基与抗体kappa轻链的可变区有很强的亲和性,所以Diamond Protein L适用于从大批量细胞培养液中捕获各种不同大小的抗体片段,如 F(ab')2、Fab、单链可变片段(scFv)和半抗。
Fig. 1 抗体IgG和抗体片段示意图
• 高刚性琼脂糖基架:高流速,可提高生产效率
• 高特异性的kappa轻链:可高效捕获广泛选择的抗体和抗体片段
• 高结合载量:能减少工艺时间和介质使用量,降低生产成本
+颗粒大小呈正态分布,平均颗粒大小是填料体积分布累计的中值粒径
++线性流速 100cm/h,柱高 10cm,缓冲液条件:20mM PB、0.15M NaCl,pH7.2
+++2%苯甲醇仅用于国外运输或者客户指定
• 层析填料: Diamond Protein L
• 样品和上样量:某半抗,30mg/mL填料
• 平衡缓冲液:20mM Tris-HCl,0.15M NaCl,pH7.2
• 洗脱缓冲液:50mM Gly-HCl,pH2.9
• CIP缓冲液: 15mM NaOH
Fig. 2 Diamond Protein L亲和层析图谱
Fig. 3 Diamond Protein L亲和层析纯化结果
• 结合缓冲液:通常采用中性缓冲液,如:20mM PB,0.15M NaCl,pH7.2
• 洗脱缓冲液:采用低pH缓冲液,如:0.1M柠檬酸钠 pH2.0~3.5
在洗脱步骤可以通过pH线性梯度洗脱,优化出合适的洗脱pH范围。对于具有挑战性的抗体或抗体片段,纯化中通过优化洗脱缓冲液浓度,可以进一步去除洗脱产品中的聚集体等相关杂质[2]。
如果洗脱产品收率异常,建议在CIP之前先进行再生。在用NaOH进行CIP之前,建议先用中性pH溶液平衡层析柱,避免低pH下缓冲液与高pH NaOH溶液直接接触而可能导致的柱内温度升高的问题。
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