【细胞学堂】— 从传代到换液，养好22RV1细胞

22RV1是来自异种移植(在阉割引起前列腺癌衰退又在其Father的雄性激素信赖型CWR22嫁接后复发的小鼠中连续传代)的人前列腺癌上皮细胞系^[1]。此细胞系表达前列腺特异抗原PSA。二羟基睾丸脂酮可轻微刺激细胞生长，经Western Blot检测溶解产物与抗雄性激素受体抗体起免疫反应。EGF可刺激细胞生长，但TGFβ-1不能抑制细胞生长。该细胞在裸鼠中成瘤。近年来，研究表明22RV1产生高滴度的人类逆转录病毒XMRV(异嗜性小鼠白血病病毒相关病毒)。

细胞特性

培养注意事项

1、该细胞有密度依赖，传代比例不宜超过1：4；
2、细胞复苏时需要离心去除DMSO，离心接入皿中，静置两天，保持培养箱环境稳定。冻存细胞复苏最初阶段，贴壁量少，成簇松散贴壁，但是最终细胞会变平，并且扩散成很好的单层，这个过程需要4-5天时间；
3、细胞冻存后复苏成活率不高，推荐冻存液配比为90%血清+10% DMSO；
4、细胞生长缓慢，细胞只能生长到90%的汇合度

传代步骤

1、吸出原培养液；

2、加入2mL左右PBS，轻轻晃动培养瓶润洗细胞，吸出PBS丢弃；

3、加入1mL左右胰酶，轻轻晃动培养瓶使之浸润所有细胞；

4、放入培养箱消化，消化2- 3分钟左右，显微镜下看到细胞块中间的细胞明显分离变圆且自然脱落（细胞一定要彻底消化下来，全程不要拍打培养瓶）；

5、加入3mL含血清的培养基终止消化，轻轻/反复吹打细胞，在显微镜下观察，细胞尽量呈单颗细胞的悬浮液；；

6、收集细胞悬液离心，1000-1200rpm（250-300g）/min，3-5分钟，离心完吸出上清丢弃；

7、加入新鲜培养基，吹打几下混匀细胞即可，按需接种到新培养瓶，补足足量培养基，拧松瓶盖或使用透气瓶盖进行培养；

8、检查培养箱二氧化碳，温度和水盘。

换液步骤

1、吸出旧培养基并沿培养瓶侧边（非培养细胞容器底部）添加新的培养基；

2、每2-3天换液一次；

 
传代比例和频次

细胞长满80%后，按照1：2的比例传代，2-3天可再次生长到80%；1：3传代，再次长满到80%需要3天以上的时间。

细胞正常生长图片