一、细胞基本属性 |
细胞名称 | P3X63Ag8 小鼠骨髓瘤细胞 |
细胞别称 | P3-X63-Ag8,P3/X63-Ag8,P3/X63/Ag8,P3-X63Ag8,P3X63 Ag8,X63-Ag8,X63-AG8,x63-Ag8,P3X63,X63,GM03571 |
商品货号 | ORC0151 |
种属来源 | 小鼠 |
年龄性别 |
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组织来源 | B 淋巴细胞;浆细胞;骨髓瘤 |
生长特性 | 悬浮生长 |
细胞形态 | 淋巴母细胞样 |
背景简介 | 这株细胞能抗8-氮杂鸟嘌呤但对HAT敏感。 可以用作杂交瘤时的融合配体。 能生成但不分泌免疫球蛋白。 据报道它是由于缺失了3-酮类固醇还原酶活性的胆固醇营养缺陷型。 检测表明肢骨发育畸形病毒(鼠痘)阴性。 在本库通过支原体检测。 |
生物安全等级 | 1 |
细胞规格 | 1×106cells/T25培养瓶或者1mL冻存管包装 |
支原体检测 | 阴性 |
基因表达情况 | immunoglobulin; monoclonal antibody |
保藏机构 | ATCC; TIB-9 ECACC; 85011401 |
培养基 | RPMI-1640,90%;FBS,10%。 |
培养条件 | 气相:95%空气+5%二氧化碳;温度:37℃ |
冻存条件 | 无血清冻存液,液氮储存 |
倍增时间 | ~16-26小时 |
STR鉴定位点 | 18-3:18,19,20;9-2:13.3,14.3;6-7:12;5-5:13,14,15;X-1:25,26; 15-3:21.3,22.3,23.3;12-1:15,16,17;6-4:17,18,19;4-2:20.3,21.3,22.3; jaridl:X |
二、细胞培养操作
1) 复苏细胞:以下细胞培养冻存处理仅供参考,具体操作步骤以随货产品说明书为主。
复苏细胞:将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻,加入4mL 培养基混合均匀。在1000RPM 条件下离心4 分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜(或将细胞悬液加入10cm皿中,加入约8ml培养基,培养过夜)。第二天换液并检查细胞密度。
2) 细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。
a、弃去培养上清,用不含钙、镁离子的 PBS 润洗细胞 1-2 次。
b、加1ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中,置于37℃培 养箱中消化1-2分钟,然后在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
c、按6-8ml/瓶补加培养基,轻轻打匀后吸出,在1000RPM条件下离心4分 钟,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀。
d、将细胞悬液按 1:2 比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
3) 细胞冻存:待细胞生长状态良好时,可进行细胞冻存。下面T25瓶为例;
a、收集细胞及细胞培养液,装入无菌离心管中,1000rpm条件下离心4 min,弃去上清液,用PBS清洗一遍,弃尽PBS,进行细胞计数。
b、根据细胞数量加入无血清细胞冻存液,使细胞密度5×106~1×107/mL,轻轻混匀,每支冻存管冻存1mL细胞悬液,注意冻存管做好标识。
c、将冻存管放入-80℃冰箱,24 h后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。
三、培养注意事项
1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好,培养液是否有漏液、浑浊等现象,若有上述现象发生请及时和我们联系。
2. 仔细阅读细胞说明书,了解细胞相关信息,如细胞形态、所用培养基、血清比例、所需 细胞因子等,确保细胞培养条件一致,若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题,责任由客户自行承担。
3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面,显微镜下观察细胞状态。因运输问题,部分细胞由于温度变化及剧烈碰撞死亡破碎形成碎片,是正常现象。观察好细胞状态后,75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置2-4h。
4. 贴壁细胞可以消化,悬浮细胞直接混匀收集细胞,900rpm-1000rpm 离心3 min,弃上清。加5mLPBS 重悬细胞,再900rpm-1000rpm 离心 3 min,用新鲜的完全培养基重悬细胞,并接种到新的培养瓶或培养皿中,置于培养箱中进行培养。
5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。
6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片,记录细胞状态,便于和我司技术部沟通交流。由于运输的原因,个别敏感细胞会出现不稳定的情况,请及时和我们联系,告知细胞的具体情况,以便我们的技术人员跟踪回访直至问题解决。
7. 该细胞仅供科研使用。
8. 备注:运输用的培养基 (灌液培养基) 不能再用来培养细胞,请换用按照说明书细胞培 养条件新配制的完全培养基来培养细胞。收到细胞后第一次传代建议 1:2 传代 。
9. 注意:1:2 传代就是 1 个 T25 瓶传 2 个 T25 瓶或者 2 个 6cm 皿。不是 1 个 T25 瓶传 2 个10cm 皿。
特别提示:本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!以实际收货产品说明书为准,网站说明书仅供参考。
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