人 Pan T 细胞分离试剂盒

基本信息

[组件]

1 mL Pan T 细胞生物素抗体混合物，人质：生物素偶联单克隆混合物

针对 CD14、CD15、CD16、CD19、CD34、CD36、CD56、CD123 和 CD235a 的抗体（糖蛋白 A）。

2 mL Pan T 细胞微珠混合物，人：与单克隆抗生物素抗体（同种型：小鼠 IgG1）和单克隆抗 CD61 抗体（同种型：小鼠 IgG1）偶联的微珠。

[容量]

对于总共 10⁹ 个单元格。

[产品格式]

所有组分均以含有稳定剂和0.05%叠氮化钠的缓冲液提供。

[存储]

避光储存在2-8°C。 不要冻结。有效期在小瓶标签上标明。

[试剂和仪器要求]

●缓冲液：制备含有磷酸盐缓冲盐水（PBS）、pH 7.2、0.5%牛血清白蛋白（BSA）和2mM EDTA的溶液。使用前对缓冲液进行脱气，因为气泡可能会堵塞色谱柱。

●（可选）预分离过滤器（30μm）以去除细胞团块。

● 选择合适的分隔符和列：

▲ 注意：使用此试剂盒时，不需要的细胞级分被标记，而目标细胞保持未标记状态。因此，根据目标细胞频率，标记的部分可以代表总细胞的大部分。

为避免阻塞列，请不要超过每列标记的最大单元格数。估计样品中标记细胞的数量，必要时拆分样品并使用适当数量的分离柱。

细胞分离方案

1. 使用专业分离机全自动细胞标记和分离

2. 手动磁性贴标

[使用专业分离机全自动细胞标记和分离]

▲ 有关使用Pro分离器的说明，请参阅用户手册。

▲ 所有缓冲温度应为≥10°C。

▲ 将试管放置在以下冷藏架位置：

位置 A = 样品，位置 B = 负分数，位置 C = 正分数

1.打开仪器进行自动初始化。

2. 转到试剂菜单并选择读取试剂。使用专业分离器上的条形码扫描仪扫描每个试剂瓶的二维条形码。将试剂放在试剂架上的适当位置。

3. 将样品和收集管放入冷藏架。

4. 转到“分离”菜单，从“标记”子菜单中选择每个样品的试剂名称（将自动选择正确的标记、分离和洗涤方案）。

5. 在“体积”子菜单中输入样品体积。按回车键。

6. 选择运行。

7.在位置B =负分数处收集富集的T细胞级分。

[随后使用专业分离机进行自动细胞分离]

▲ 有关使用Pro分离器的说明，请参阅用户手册。

▲ 所有缓冲温度应为≥10°C。

▲ 将试管放置在以下冷藏架位置：

位置 A = 样品，位置 B = 负分数，位置 C = 正分数

8. 准备并灌注仪器。

9. 按照用户手册中的说明进行操作。

10.建议使用“耗尽”程序。在位置B =负分数处收集富集的T细胞。

[手动磁性标签]

▲ 快速工作，保持细胞低温，并使用预冷溶液（2-8°C）。

▲ 下面给出的磁性标记体积最多为10⁷个总细胞。使用较少的单元格时，请使用指示的相同体积。当使用较高的细胞数量时，请相应地扩大所有试剂体积和总体积。

▲ 为了获得最佳性能，在贴标前获得单细胞悬浮液非常重要。

1.准备细胞并确定细胞数量。

2. 将细胞沉淀重悬于每 40⁷ 个总细胞的 10 μL 缓冲液中。

3. 每 10⁷ 个总细胞加入 10 μL Pan T 细胞生物素抗体混合物。

4.充分混合，在冰箱（5-2°C）中孵育8分钟。

5. 每 30⁷ 个总细胞加入 10 μL 缓冲液。

6. 每 20⁷ 个总细胞加入 10 μL Pan T 细胞微珠混合物。

7.充分混合，在冰箱（10-2°C）中孵育8分钟。

8.进行后续的磁性细胞分离。

▲ 注意：磁分离至少需要 500 μL。如有必要，向细胞悬液中添加缓冲液。

[后续手动细胞分离]

▲ 始终等到色谱柱储液槽为空后再进行下一步。

9. 将LS柱置于合适的分离器的磁场中。

10. 用 3 mL 缓冲液冲洗制备色谱柱。

11.将细胞悬液涂在色谱柱上。收集包含未标记细胞的流通，代表富集的T细胞。

12. 用 3 mL 缓冲液洗涤色谱柱。收集通过的未标记细胞，代表富集的T细胞，并与步骤11的流出物结合。

13. （可选）从分离器中取出色谱柱并将其放在合适的收集管上。将5ml缓冲液移液到色谱柱上。通过将柱塞牢固地推入色谱柱中，立即冲洗出磁性标记的非T细胞。