人脐静脉血管内皮细胞的培养方法

                        HUV-EC-C人脐静脉血管内皮细胞的处理方法！

　一、细胞简介：

　　细胞名称：HUV-EC-C[HUVEC](人脐静脉血管内皮细胞)(STR鉴定正确)

　　别称HUV-EC-C;HUVEC

　　背景描述：HUV-EC-C[HUVEC]细胞可用于血管内皮修复损伤的研究。

　　组织来源：脐静脉/血管内皮

　　生长特性：贴壁细胞

　　细胞形态：上皮细胞样

　　生物安全等级    1

　　生长培养基    Ham'sF-12K＋0.1mg/mlHeparin＋0.03-0.05mg/mlECGs＋10%FBS＋1%P/S

　　推荐传代比例    1:2-1:4

　　推荐换液频率    2~3次/周

　　倍增时间    ~23.5hours

　　冻存条件

　　冻存液：55%基础培养基+40%FBS+5%DMSO

　　温度：液氮

　　培养条件

　　气相：空气，95%；CO2，5%

　　温度：37℃

　　致瘤性    No,thecellswerenottumorigenicinimmunosuppressedmice.Yes,thecellsdidformcoloniesinsemisolidmedium.

　　基因表达情况    factorVIII

　　二、人脐静脉血管内皮细胞的培养步骤

　　1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入5mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心5分钟，弃去上清液，补加4-6mL完全培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入6cm皿中），培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。

　　2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

　　3）细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。弃培养基后加入少量胰酶，细胞变圆脱落后，进行离心收集，1000RPM条件下离心8-10分钟，去除上清，按冻存数量加入到冻存液中。

　　三、对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：

　　1、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

　　2、加1-2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2min，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加5ml以上含10%血清的完全培养基终止消化。

　　3、轻轻吹打细胞，完全脱落后吸出，在1000RPM条件下离心8-10分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。

　　4、按5-6ml/瓶补加培养液，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含5-6ml培养液的新皿中或者瓶中。

　　四、人脐静脉血管内皮细胞收到后的处理方法

　　细胞在培养瓶中培养至良好状态后灌满完全培养液并封好瓶口是细胞运输的办法。收到细胞回到自己的实验室后，先打开外包装，用75%酒精喷洒整个瓶消毒后放到超净台内，严格无菌操作，培养箱静置2-4小时。镜下观察：未超过80%汇合度时，可将瓶装的完全培养液收集至离心管中，加入6ml完全培养基，放入37℃、5%CO2孵箱培养；超过80%汇合度时，根据情况传代或者冻存，具体操作见细胞培养步骤。（注意发货的是密封培养瓶的话，放入培养箱培养记得培养瓶盖子拧松）

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