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DNA恒温快速扩增试剂盒(荧光型)

供货周期: 现货
品牌: 安普未来
规格:
货号: WLE8202KIT
CAS号:
报价: ¥1
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产品介绍

原理概述:

本试剂盒基于一种常温恒温核酸快速扩增技术:在常温恒温下,重组酶和引物形成蛋白/单链核苷酸的复合体Rec/ssDNA,在辅助蛋白和单链结合蛋白SSB的帮助下,侵入双链DNA模板;在侵入位点形成D-loop区域,并开始对DNA双链进行扫描;待找到与引物互补的目的区域后,复合体Rec/ssDNA解体的同时,聚合酶也结合到引物的3’末端,开始链的延伸。本试剂盒在39 oC下,依赖核酸外切酶的作用,加入根据模版设计的特异的分子探针,使用荧光监测设备能实现对目标片段扩增过程的实时监控。

产品特点:

本试剂盒具有灵敏度高、特异性强、反应时间短(仅需20 mins等优点,反应组分为干粉状态,操作简便,易于保存。

可适用于各种品牌的荧光定量PCR仪、恒温荧光扩增仪器等荧光检测设备。

引物设计:

建议使用长度在30-35 bp的引物,引物过短会影响扩增速度和检测灵敏度;引物设计避免形成二级结构而影响扩增;扩增子长度建议在150-300 bp,通常不超过500 bp

荧光探针设计:

探针序列不与特异性引物识别位点重叠,长度为46-52 nt,序列避免回文序列、内部二级结构和连续的重复碱基。探针共有四个修饰位点:距离5’端的≥35 nt的中部位置标记一个dSpacer(四氢呋喃,THF),作为核酸外切酶的识别位点;THF位点的上游标记一个荧光基团,下游标记一个粹灭基团,两个基团的间距为2-4 ntTHF距离3’末端≥15 nt,并且3’末端标记一个修饰基团,例如胺基、磷酸基团或C3-Spacer

试剂盒组成:

组成

含量

A buffer

1.6 mL×1

B buffer

150 μL×1

正对照模板

30 μL×1

正对照引物探针Mix

70 μL×1

试剂

48

使用说明书

1

试剂盒储存:

运输条件:低温运输;

储存条件:储存温度 ≤ -20 oC,避光保存,避免重压、反复冻融;

产品有效期:14个月。


操作步骤:提前30分钟将试剂盒所需组分取出,室温融化,震荡混匀

1) 每个干粉反应管加入29.4 μL A buffer(注意:A buffer需完全融化混匀,否则会对实验效果产生影响);

2) 每个反应管分别加入2 μL上游引物、2 μL下游引物和0.6 μL探针(引物和探针浓度为10 μM,对于多个反应、步骤1和步骤2可以混合后再分装至反应管中);

3) 向反应管中依次加入11.5 μL ddH2O2 μL核酸模板(可根据核酸浓度调整加入的核酸模板体积,并相应调整加入的ddH2O体积,至模板与ddH2O总体积为13.5 μL);

4) 最后向反应管中加入2.5 μL B buffer并充分混合请务必上下颠倒甩动反应管8-10次进行混匀;对于多个反应,建议将B buffer加至反应管的盖子内侧上下颠倒后混匀)

5) 混匀后,将反应液甩(或快速离心)至管子底部,然后立即将反应管放入荧光检测设备中。荧光检测程序设置为:恒温39 oC;每30 s采集一次FAM通道(信号采集通道的选择与荧光探针设计一致)荧光值;反应时间20 mins

注:如使用ABI系列PCR仪,请务必于passive referencequencher处均选择“none”

体系配制                             正对照荧光结果图

组分

体积(μL

A buffer

29.4

2

上游引物(10 μM)*

下游引物(10 μM)*

2

探针(10 μM)*

0.6

ddH2O 和DNA模板

13.5

B buffer

2.5

总体积

50

 *正对照反应单元体系配制:正对照模板加入2μL加入4.6 μL正对照引物探针Mix(已包含探针和/下游引物,其他组分参照体系配制

注意事项:

1 由于试剂盒灵敏度非常高,在进行反应时请注意避免核酸污染,并设置空白对照;

2 使用时请取出实验所需的MIRA反应单元的数量,剩余部分请置于存储条件下。


工商信息

企业名称

潍坊安普未来生物科技有限公司

企业信息已认证

企业类型

信用代码

91370700MA3PWXPW73

成立日期

2019-05-31

注册资本

100

经营范围

物技术推广服务;销售:Ⅱ类、Ⅲ类医疗器械;生物制品、生物仪器的研发、生产与销售;货物或技术进出口

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DNA恒温快速扩增试剂盒(荧光型)由安普未来生物科技有限公司为您提供,货号WLE8202KIT,规格:,CAS号:,如您想了解更多关于DNA恒温快速扩增试剂盒(荧光型)价格、DNA恒温快速扩增试剂盒(荧光型)结构式、批发、用途等信息,欢迎咨询。除供应DNA恒温快速扩增试剂盒(荧光型)外,还可为您提供DNA恒温快速扩增试剂盒(胶体金试纸条型)、甲型流感病毒通用型荧光检测试剂盒、RNA恒温快速扩增试剂盒(荧光型)-II等试剂,公司有专业的客户服务团队,是您值得信赖的合作伙伴,APWL客户服务电话,售前、售后均可联系。

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公司名称: 潍坊安普未来生物科技有限公

公司地址: 山东省潍坊市高新区生物医药科技产业园G座 联系人: 苑先生 邮编: 261000

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