布鲁氏菌竞争ELISA诊断试剂盒

           布鲁氏菌竞争ELISA诊断试剂盒

  通用名：布鲁氏菌cELISA抗体检测试剂盒, 用于检测牛、羊血清中的光滑型布鲁氏菌抗体。

【主要成分及含量】

【作用与用途】  用于检测牛、羊血清中的光滑型布鲁氏菌抗体。

【用法与判定】

1  用法

1.1  样品处理  取动物全血，待血液凝固后，以4000r/min离心10分钟，收集上清，血清应清亮，无溶血。

1.2  1×洗涤液的配制  使用前，将20×洗涤液恢复至室温（20～25℃），并摇动，使结晶溶解（可在37℃水浴中加热5～10分钟），然后用去离子水作1:20稀释，充分混匀。

1.3  待检血清和对照血清的稀释  在血清稀释板中将待检血清、阴性对照血清和阳性对照血清用样品稀释液作1:20稀释。

1.4  单克隆抗体的稀释   用样品稀释液按1：50稀释，充分混匀。

1.5  操作步骤

1.5.1  加样  取抗原包被板（根据样品多少，可拆开分次使用），以1×洗涤液300μl/孔洗板1次，弃去洗涤液。将稀释好的待检血清、阳性对照血清和阴性对照血清分别加入到ELISA板中，50μl/孔，其中阳性对照血清和阴性对照血清各加2孔（孔1、孔2）。加样结束后， 加入已稀释好的单克隆抗体，每孔50μl，振荡混匀5分钟。37℃作用30分钟后取出反应板，弃去反应液，每孔加入300μl 1×洗涤液，洗涤3次后甩干。

1.5.2  加酶标抗体  将羊抗鼠酶标抗体用羊抗鼠酶标抗体稀释液作1:100稀释后，每孔加入100μl，37℃作用30分钟。按1.5.1中的方法洗涤3次，甩干。

1.5.3  显色与终止  将底物溶液A和B按1:1（V/V）混合后，立即加入到ELISA反应板中，100μl/孔，室温避光显色15分钟后，每孔加50µl终止液终止反应。

2  结果判定  反应终止后，15分钟内用酶标仪测定OD_450nm值。

2.1  计算公式

抑制率（PI）=（阴性对照OD_450nm—检测样品OD_450nm）／阴性对照OD_450nm×100%。

2.2  试验成立条件

2个阴性对照血清重复测定孔的平均OD_450nm应≥2.0；2个阳性对照血清重复测定孔的平均OD_450nm应＜0.2，且PI平均值应≥90%时，试验成立。

2.3  结果判定

当血清样本的PI≥30%时，为布鲁氏菌抗体阳性；

当血清样本的PI＜30%时，为布鲁氏菌抗体阴性。

【注意事项】

（1） 本试剂盒仅供体外检测使用。

（2） 严格按照说明书操作，不同批号组分不得混用。

（3） 所有试剂一律于2～8℃保存，使用前应在室温平衡15～30分钟后方可使用，抗原包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。

（4） 血清稀释板只能使用1次，未用完的血清稀释板应将用过的孔充分洗涤拍干，并进行标记，避免下次检测时发生混淆。

（5） 加样时应尽量避免起泡及液体溅出，避免样本间相互污染。

（6） 底物溶液应避光保存，避免与氧化剂接触，盛装底物溶液的容器应保持干净。

（7） 终止液为1M的HCL溶液，具有腐蚀作用，避免接触眼睛和皮肤。

【贮藏与保存期】  2～8℃保存，有效期为12个月。

【规格】  （1）96孔/盒 （2）192孔/盒 （3）480孔/盒 （4）960孔/盒