‍‍ 会议介绍 作为近两年增长最快的生物医药细分领域，核酸疗法持续高速发展中，新冠疫情更是将核酸药物mRNA疫苗推上风口浪尖。而在后疫情时代下的今天，mRNA又将如何发展？拓展新的适应症、优化工艺生产技术、扩大产能供应，以及即将到来的首款国产小核酸药物，核酸疗法正在迎来大时代！I-RNA 第三届核酸疫药物及疫苗产业深度聚焦峰会携手80+行业大咖和1200+行业同仁，共同探讨核心技术分享最新成果，开启产业化征程！会议时间2023年4月27日-28日会议地点苏州金鸡湖凯宾斯基大酒店2楼 江苏苏州工业园区，国宾路1号锘海生命科学展位号: B16    此次会议锘海将携各类产品技术资料及设备样机，向您展示纳米药物制备系统及纳米药物制备、检测服务—从处方筛选到制剂表征全线过程。纳米药物制备系统通过微流控芯片技术制造纳米颗粒包裹体，可包裹化药、mRNA、siRNA、DNA等小分子物质，实现该物质的体内递送，从低通量至高通量均可覆盖，适用于临床前研究和符合GMP的临床生产，并可在纳米颗粒表面添加标记物制造靶向药物。现场更有专业工程师与您探讨交流技术难点及实验步骤，欢迎各位老师莅临咨询！-END-锘海生命科学产品系列锘海LS18平铺光片显微镜组织透明化/染色、平铺光片显微成像科研服务生物组织透明化试剂盒(水性)生物组织膨胀试剂盒锘海组织透明化底透台(Smart Batch+) 组织透明化及免疫染色系统(VISIKOL) 组织透明化试剂盒铭汰 Microflow ™系列微流控纳米药物制备系统锘海近红外二区活体荧光/荧光寿命成像系统锘海类器官、3D细胞培养系统(Photosound) 小动物3D光声/荧光成像系统(regenHU)生物3D打印机耗材 (纳米标尺•小鼠骨钉•细胞水凝胶)CRO/CMO服务 • 显微镜配件及光学配件‍‍

微流控技术是目前制备脂质纳米粒（Lipid nanoparticle，LNP）最先进的技术，越来越多的企业、高校研究所，开始使用微流控技术开展脂质纳米粒的研发与生产。微流控技术是通过微流控设备，使两相液体在微流控芯片中，以层流的形式在相界面快速发生自组装反应，制备脂质纳米粒，用于递送核酸、小分子、多肽、蛋白等活性成分。粒径和PDI是评价其制备效果的重要指标，本文将为大家介绍脂质纳米粒粒径和PDI的测定方法，并通过具体的应用案例，展示粒径和PDI对于评价脂质纳米粒制备效果的重要意义。图1 微流控技术原理01粒径和PDI的测量方法粒径是表征颗粒大小的参数，常用于测定脂质纳米粒粒径的方法为动态光散射法（Dynamic light scattering，DLS）。动态光散射的原理是基于颗粒对光的散射。悬浮于液体中的脂质纳米粒，并不是静止的，由于分子的随机碰撞，脂质纳米粒不停地进行布朗运动。当激光照射脂质纳米粒时，布朗运动会导致颗粒对光的散射强度随时间涨落。颗粒越小，扩散或运动速度越快，散射光涨落越快，反之亦然。布朗运动的速率可以量化为平移扩散系数，通常用大写字母D表示。粒径与扩散系数的关系可以用斯托克斯-爱因斯坦方程（Stokes-Einstein equation）表示:DLS测量的是脂质纳米粒的流体力学粒径（Hydrodynamic diameter，DH），指的是与被测颗粒有相同扩散速率的球体直径。这个球体包括核心颗粒和任何与它表面相结合的物质，如任何的离子、吸附的聚合物等。图2 流体力学直径示意图利用DLS，我们可以快速测量样品中所有颗粒的粒径，得到基于光强的粒度分布曲线，显示样本中每个粒径的脂质纳米粒群体的散射光强度占比，也可以转换为基于体积或基于个数的粒径分布。同时，可以得到脂质纳米粒样本的平均粒径（Z-Average）、多分散系数（Polydispersity index，PDI or PI）。PDI是反映粒径分布宽度的无量纲数值，范围为0~1之间，数值越小，代表粒度越均匀，粒度分布越集中。通过铭汰微流控纳米药物制备系统合成的脂质纳米粒，根据配方及包裹活性成分的不同，粒径通常为40-500 nm，PDI通常0.3以下，对于成熟的配方，PDI在0.1以下。如图2所示，使用铭汰MicroFlow S微流控纳米药物制备系统，FlowOrigin M试剂盒包封mRNA，制备的核酸脂质纳米粒，利用DLS纳米粒度仪测量的结果。从结果可以看出粒径分布曲线为单峰且分布非常集中，Z-Average为83.45 nm， PDI为0.032，合成效果非常好。图3 核酸脂质纳米粒的DLS检测结果02粒径及PDI评价脂质纳米粒制备效果的应用举例2.1 通过粒径和PDI评估不同配方的合成效果使用铭汰MicroFlow S微流控纳米药物制备系统，分别按照Onpattro、Pfizer-BioNtech、Moderna三家经典配方以及铭汰FlowOrigin M试剂盒，合成mRNA-LNP，粒径及PDI的结果如图3所示。可以看出四家配方合成的该核酸脂质纳米粒粒径均为75 nm左右，PDI均为0.1以下，说明四家配方使用铭汰的微流控纳米药物制备系统均能获得非常好的合成效果。    图4 不同配方使用MicroFlow S合成mRNA-LNP的结果对比2.2通过粒径和PDI评价微流控芯片的重复使用效果采用相同配方，使用同一个微流控FlowTech S芯片，重复合成12次脂质纳米粒的粒径及PDI结果对比，如图4所示。可以看出，12次合成的脂质纳米颗粒粒径均为80nm左右，PDI为0.1以下，说明铭汰微流控芯片重复使用12次，仍然可以达到非常好的制备结果。 图5 同一微流控芯片重复合成12次结果对比2.3 通过粒径和PDI评价设备放大合成效果通过粒径、PDI，还可以比较不同设备的合成效果。图5为使用相同的配方，分别使用铭汰小小试MicroFlow T、小试MicroFlow S以及中试MicroFlow M合成的脂质纳米粒粒径和PDI的对比，粒径均为85 nm左右，PDI均为0.15以下，说明铭汰微流控纳米药物制备系统的系列产品，具有一致性的制备效果。  图6 铭汰微流控设备放大一致性对比03小结通过对脂质纳米粒粒径、PDI的测量及表征，有利于进行配方验证、筛选及优化，有利于评估微流控纳米药物制备系统的制备效果并选择适合的微流控纳米药物制备系统。铭汰拥有微流控纳米药物制备系统全产品线，可以为纳米药物研发生产的各个阶段，提供一站式的解决方案。应用范围纳米药物制备系统●核酸脂质纳米粒科普——RNA-LNP包封率测定●核酸脂质纳米粒科普——氮磷比计算● 核酸脂质纳米粒科普——后处理● 核酸脂质纳米粒科普——超滤管规格-END-锘海生命科学产品系列锘海LS18平铺光片显微镜组织透明化/染色、平铺光片显微成像科研服务生物组织透明化试剂盒(水性)生物组织膨胀试剂盒锘海组织透明化底透台(Smart Batch+) 组织透明化及免疫染色系统(VISIKOL) 组织透明化试剂盒铭汰 Microflow ™系列微流控纳米药物制备系统锘海近红外二区活体荧光/荧光寿命成像系统锘海类器官、3D细胞培养系统(Photosound) 小动物3D光声/荧光成像系统(regenHU)生物3D打印机耗材 (纳米标尺•小鼠骨钉•细胞水凝胶)CRO/CMO服务 • 显微镜配件及光学配件锘海生物科学仪器（上海）有限公司86-21-37827858info@nuohailifescience.comwww.nuohailifescience.com13818273779上海市松江区九亭镇云凯路66号科技绿洲二期10号楼

会议介绍微纳米技术与医疗健康创新大会（2022）将于2023年4月在上海举办。会议将围绕微纳米机器人在医学上的应用；微纳创新诊疗方法；微纳生物医学传感与检测技术；纳米分子医学成像；纳米生物材料；微纳生物医疗器械设计与制造；创新纳米药物；药物递送系统；公共卫生与生物安全；纳米肿瘤学等热门话题展开交流。总结两年来微纳米技术在抗击新冠疫情方面取得的科研成果，搭建微纳米技术与医疗健康应用发展和分享平台，推动医疗健康发展，创造人民美好生活的未来。会议信息会议时间：2023年4月22-24日（21日报到）会议地点：上海嘉定喜来登酒店锘海生命科学展位：A11此次会议锘海将携各类产品技术资料及样机，向您展示纳米药物制备系统及纳米药物制备、检测服务—从处方筛选到制剂表征全线过程。纳米药物制备系统通过微流控芯片技术制造纳米颗粒包裹体，可包裹化药、mRNA、siRNA、DNA等小分子物质，实现该物质的体内递送，从低通量至高通量均可覆盖，适用于临床前研究和符合GMP的临床生产，并可在纳米颗粒表面添加标记物制造靶向药物。现场更有专业工程师与您探讨交流技术难点及实验步骤，欢迎各位老师莅临咨询！相关产品链接：-END-锘海生命科学产品系列锘海LS18平铺光片显微镜组织透明化/染色、平铺光片显微成像科研服务生物组织透明化试剂盒(水性)生物组织膨胀试剂盒锘海组织透明化底透台(Smart Batch+) 组织透明化及免疫染色系统(VISIKOL) 组织透明化试剂盒铭汰 Microflow ™系列微流控纳米药物制备系统锘海近红外二区活体荧光/荧光寿命成像系统锘海类器官、3D细胞培养系统(Photosound) 小动物3D光声/荧光成像系统(regenHU)生物3D打印机耗材 (纳米标尺•小鼠骨钉•细胞水凝胶)CRO/CMO服务 • 显微镜配件及光学配件锘海生物科学仪器（上海）有限公司86-21-37827858info@nuohailifescience.comwww.nuohailifescience.com13818273779上海市松江区九亭镇云凯路66号科技绿洲二期10号楼

前言脂质体及聚合物作为纳米药物的常用载体，在药物合成方面已取得了巨大的成功，但在靶向递送方面，仍存在着诸多挑战，纳米药物该如何实现靶向递送呢？在谈论靶向之前，先要了解一个关键的药理学概念，以器官靶向为例：器官靶向药物输送不是将所有给药剂量都输送到目标器官，而是提供足够的剂量以达到所需的生物效果，同时限制脱靶积累的毒性；即使大部分注射剂量没有到达目标器官，也应该足以引起生理效应并为患者提供益处。靶向方式分类纳米药物靶向的方式多种多样，总的来讲，可以分为三大类（如图1）。图1.  靶向方式归类图被动靶向被动靶向依赖于调整纳米颗粒的物理性质，如大小、形状、硬度和表面电荷，使其与解剖学及生理学相结合。例如，调节纳米颗粒的大小可以确定纳米颗粒从不连续的血管（如肝脏和脾脏中的血管）外渗的趋势。主动靶向主动靶向包括用化学或生物的方法修饰纳米颗粒的表面，使其特异性地与靶器官高度表达的受体或其他细胞因子相结合。例如，用单克隆抗体修饰纳米颗粒，以使核酸传递到难以转染的免疫细胞中。内源性靶向内源性靶向包括设计纳米颗粒的组成，使其在注射时与血浆蛋白的一个不同的亚群结合，从而将其引导到目标器官并促进特定细胞的摄取。例如，参与体内胆固醇运输的蛋白质已被证明是脂质纳米颗粒有效的肝细胞传递所必需的。对比而言，被动靶向和内源性靶向的设计度与可控性相对较低，主动靶向自然成为了靶向递送的研究焦点。在肝外靶向的研究中，就涉及了较多的主动性靶向，表1也列出了多种肝外给药的纳米颗粒组合物。表1. 用于肝外给药的纳米颗粒组合物靶向修饰方法药物靶向本质上为官能团之间的相互作用，即纳米药物表面的核心基团与受体部位的基团进行化学结合。以脂质纳米颗粒为例，载体组分中的PEG脂质多位于颗粒表面且本身易于修饰，因此，可以在PEG脂质上加载受体部位的结合基团以实现靶向目的。以下列举了几种常见的PEG脂质修饰方法。马来酰亚胺修饰使用DSPE-PEG2000-马来酰亚胺作为功能化PEG脂质，替换LNP中一定摩尔量的聚乙二醇脂质，通过其取代的羧基端半胱氨酸直接与肽偶联，可以形成肽靶向的纳米粒子。再如SS-31，一种线粒体靶向的四肽，具有巯基，只需与马来酰亚胺标记的脂质纳米颗粒孵育，即可进行硫酰马来酰亚胺偶联。NHS修饰NHS酯通常用于标记胺基生物分子。NHS酯与胺基的反应具有pH依赖性，结合较佳的pH值与生理环境的pH值相同。使用DMG-PEG-COOH-NHS作为功能化PEG脂质，替换LNP中一定摩尔量的聚乙二醇脂质，通过在C端添加赖氨酸修饰MH42，并通过其侧链的伯胺偶联，可以形成肽靶向的纳米粒子。同样，许多具有胺基的抗体和靶向肽也可通过该反应偶联到脂质纳米颗粒上：乳铁蛋白可特异性结合活化的结肠巨噬细胞上的LRP-1，实现细胞靶向抗炎治疗；还有较为熟知的程序性死亡配体1单克隆抗体的应用。氨基修饰氨基有利于醛酮分子的化学选择性附着。甘露聚糖还原端醛基与氨基羧基修饰的脂质之间肟偶联反应的正交特性保证了脂质纳米颗粒表面多糖分子的取向。甘露聚糖受体靶向脂质体既可以作为抗菌药物递送的载体，也可以作为用于免疫治疗的重组疫苗的载体。DBCO修饰DBCO标记可促进巯基-炔反应，并可选择性偶联荧光探针、亲和标记和细胞毒性药物分子。例如，抗体scFv-N3可被有效地偶联到DBCO修饰的脂质纳米颗粒上。研究发现，抗体修饰的脂质纳米颗粒可穿越血脑屏障，并诱导脑特异性积累，以治疗中枢神经系统疾病。结论：人体复杂的生化环境给纳米药物的靶向递送制造了诸多阻力。在实际探索中，被动靶向，主动靶向和内源性靶向，可作为靶向设计的联合工具，在寻找绝对的靶向位点、真实的靶向机理与达到实际的靶向效果之间寻求平衡。在此当中，主动性靶向的尝试值得支持，正如文中所讲PEG脂质的各种修饰方式，大量的设计性尝试定能排除越来越多的靶向干扰因素，朝靶向机理的挖掘处更深一步。参考文献：1.    Menon, Ipshita et al. “Fabrication of active targeting lipid nanoparticles: Challenges and perspectives.” Materials Today Advances (2022): n. pag.2.    Dilliard, S.A., Siegwart, D.J. Passive, active and endogenous organ-targeted lipid and polymer nanoparticles for delivery of genetic drugs. Nat Rev Mater (2023).3.    Herrera-Barrera, Marco et al. “Peptide-guided lipid nanoparticles deliver mRNA to the neural retina of rodents and nonhuman primates.” Science Advances 9 (2023): n. pag.应用范围:纳米药物制备系统:-END-

自新冠mRNA疫苗成功上市以来，脂质纳米粒（Lipid nanoparticle，LNP）已成为mRNA、siRNA、pDNA等核酸的优先递送载体，广泛用于mRNA疫苗及治疗。微流控技术是目前制备核酸脂质纳米粒常用的技术，包封率则是评价其制备效果的重要指标之一，下面就为大家介绍使用RiboGreen测定RNA-LNP包封率的方法。1 RiboGreen检测RNA-LNP包封率的原理1.1RNA-LNP包封率（Encapsulationefficiency，EE）：包裹在脂质纳米粒内部的RNA占RNA-LNP溶液中全部RNA的比例。1.2 RiboGreen检测RNA原理：RiboGreen是一种用于定量检测溶液中RNA含量的超敏感荧光核酸染料，当RiboGreen荧光染料处于溶液状态时，几乎没有荧光活性，与RNA结合时，其荧光活性将增加1000倍。RiboGreen-RNA复合物的荧光激发波长约500nm，发射波长约525nm，通过酶标仪，建立已知浓度RNA的标准曲线，即可得到样品RNA浓度。1.3 RiboGreen检测包封率原理：分别测定LNP-RNA溶液中游离RNA浓度，以及用Triton-100破坏LNP结构后，溶液中全部的RNA浓度，两者的差值就是包封在LNP内部的RNA浓度。通过以下公式即可计算得到包封率结果。图1核酸脂质纳米颗粒的示意图2操作要点2.1制备Buffer1X TE Buffer：使用试剂盒中20X TE Buffer稀释。2% Triton-TE buffer：使用Triton-100与1X TE buffer以体积比1：50配制。2.2添加RNA-LNP样品至全黑96孔板根据制备时RNA的量，可以大致计算需要稀释的倍数。例如，已知 mRNA的原始质量或浓度，使用铭汰MicroFlow S进行RNA-LNP合成，根据稀释、超滤等处理后的最终体积，即可估算大致总RNA浓度。同时，假设90%的包封率，即可估算游离RNA浓度。然后根据标曲的最高浓度计算需要稀释的大致倍数。这样我们就可以使用1X TE buffer将RNA-LNP稀释适合倍数以检测LNP外游离RNA浓度，使用2% Triton-TE buffer将RNA-LNP稀释适合倍数以检测总RNA浓度，建议每项检测至少两个不同稀释倍数。最后，分别移取100 μL稀释后的样本，添加到全黑96孔板。2.3标样添加一般直接使用试剂盒中100 μg/mL的RNA标样，也可以使用与待测样本类似的RNA标样来建立标准曲线。可以先用1X TE buffer将原始标样稀释到工作浓度4 μg/mL，然后参考表1的体积比，配制为一定浓度梯度的标样。分别移取各浓度的标样100 μL，添加到全黑96孔板中。注：*最终RNA浓度考虑了步骤2.4添加RiboGreen染料后的浓度    当RNA-LNP样品及特定浓度的标样添加到96孔板后，需要在37℃下避光孵育10 min，以使RNA-LNP在Triton buffer中充分裂解。2.4 RiboGreen染料添加把试剂盒中RiboGreen试剂，使用1X TE Buffer按照1：100的比例稀释，例如需要2000 μL RiboGreen染料，可将20 μL的RiboGreen试剂添加到1980 μL的1X TE Buffer中。然后各取100 μL加入到已经加有样品的96孔板中，37℃下避光孵育5min。图2 样品添加2.5酶标仪检测打开酶标仪，选择荧光模式，激发光485nm，发射光528nm，读数，记录数据。 2.6数据处理及分析    将每个样本测得的荧光值减去空白荧光值，即可得到实际荧光值。根据标样的荧光值和浓度梯度，绘制标准曲线，得到回归方程。把样品荧光值代入回归方程，乘以稀释倍数，即可得到样本的RNA浓度。根据1.3中包封率公式计算得到包封率结果。图3 标准曲线3 小结准确的包封率测定对于评价RNA-LNP的包封效果至关重要，影响着后续细胞实验和动物实验的开展。RNA-LNP包封率测定一般使用商业化的试剂盒，虽然操作环节较多，但只要细心规范，操作起来也并不难，相信大家可以得到准确的实验结果。纳米药物制备系统应用范围：往期回顾：●核酸脂质纳米粒科普——氮磷比计算● 核酸脂质纳米粒科普——后处理● 核酸脂质纳米粒科普——超滤管规格

自辉瑞/BioNTech和Moderna的2款mRNA疫苗上市以来，mRNA行业拥有的巨大前景已经得到了广泛的认可，诸多企业也已纷纷进军。然而，受限于核酸药物的开发难度，不少企业在研发初期都会遇到同样的问题：如何进行有效的核酸包裹？ 为了给更多的读者提供可借鉴的参考，小编将重点介绍MicroFlow™系列微流控设备，阐述其在核酸药物开发中起到的助力作用！MicroFlow™系列设备MicroFlow™系列微流控设备由铭汰医药设备（上海）有限公司开发，其开发之初就有着长远的设计考虑：依靠独特的芯片技术，使纳米药物早期开发、临床前放大及未来GMP生产实现工艺的无缝衔接。知识梳理在介绍设备之前，我们先来梳理一下核酸药物制备相关的知识。核酸药物的制备过程包括合成､修饰和递送三个环节。之所以将药物制备为纳米级，是因为在递送环节中纳米级的颗粒更容易透过血管壁和细胞膜等生物屏障；修饰环节则主要依靠配方的调整以及优化；而首个环节—合成环节，则需要借助于专业的设备，铭汰的MicroFlow™系列微流控设备可以合成直径为40-500nm的纳米粒子，其合成粒子的主要类型可参考图1。图1.纳米粒子类型图接下来，小编将分别介绍MicroFlow™系列微流控设备的四款产品。铭汰 Microflow T产品特点：1.Microflow T合成量为25μL~250μL，用于早期大量配方的筛选，可节省研发初期的成本消耗。2.单次制备可在数秒时间内完成，可缩短处方筛选耗时。3.混合过程高度均一且可重复。4.设备根据大量实验确定了较为通用的反应比，降低了试错成本。铭汰 Microflow S产品特点：1.Microflow S合成量为0.5~60 mL，旨在从实验规模上开发变革性药物，可制备少量样品，应用于小动物实验。2.制备速度快，总流速为0.1~50 mL/min，可节省大量时间。3.产物纳米粒子，粒径高度均一且可调；批次间重复性高。4.操作简单，可通过调整总流速、流速比等参数，来合成不同粒径的纳米粒子。铭汰 Microflow M产品特点：1.Microflow M合成总流速可达120L/h，有效的扩大了实验室合成规模，适用于更大的体内研究，如非啮齿类模型。2.保留核心的芯片技术，产品粒径、PDI与Microflow S设备无差异，实现工艺放大的快速转移。3.所有核心部件均具有高寿命、低故障率等特点；所有相关配件耐用且易更换。4.操作软件终生免费升级，提高适用性。铭汰 Microflow G产品特点：1.合成速率：120L/h（可根据需求定制，提升制备量）。2.承袭 Microflow M 特性的同时，优化设备细节，使其符合 GMP 要求。可进行大规模临床生产。3.使用与Microflow M相同的芯片设计，减少放大过程中的影响因素。4.一次性液体管路，消除清洁负担。读到这里，相必大家对于铭汰的设备已经有了初步的了解。随之可能会产生一个疑问：每一款产品是否都有与之匹配的芯片？答案是肯定的，以Microflow S设备为例，图6即为与之匹配的FlowTech S芯片。其最大特点为：在合成均一纳米粒子的前提下，能进行多次重复使用，大大的减少了研发成本。图6. FlowTech S芯片图微流控设备已经成为核酸药物开发者们的常用设备，其在合成均一纳米粒子方面有着显著的优势，铭汰公司的MicroFlow™系列微流控设备更是着眼长远，努力为纳米药物研究各个阶段提供解决方案。

上一期的内容， 我们介绍了LNP的小试工艺开发，在开发的过程中需要实施大量的实验来进行工艺优化，从而达到既定的目标。而对于绝大多数企业来讲，小试的成功只是商业化开发的首步，紧接着要面对的便是中试放大的问题。本期，小编就重点谈一下对于LNP中试放大的一些看法。首先，我们要弄清楚一点：微流控设备的主要作用是制备LNP。其制备结果的好坏可由以下几个参数来评定：纳米粒子的粒径、PDI以及包封率。然而，在依据这几个参数进行评定时，一些初入此领域的研究者可能会走入误区： 为什么我制备的纳米粒子PDI这么高，为什么包封率还不到５０％，是不是设备性能有问题呢？实际上，好的制备结果当然不是三两次的ｄｅｍｏ测试就能得到的，它更多是在大量的小试实验摸索中产生的。就好比我们制备了一种LNP：粒径满足既定目标,PDI为0.05，包封率为99%，然而，在进行动物体内荧光检测时，信号却微弱，这个时候我们可能就要考虑配方的问题了，而不是设备本身，毕竟，递送环节出现的问题很难从制备环节找到答案 。言归正传，小编先呈现一组铭汰S系列设备（小试）的测试结果。图1.S系列设备8批次测试结果如图1，通过配方调控，LNP的粒径被控制在85nm左右，PDI小于0.1，8批次的测试显示出很好的粒子稳定性。假定此结果为小试的工艺目标，我们该如何对其进行工艺放大？图2.S系列设备不同流速下测试结果工艺放大过程实际上是制备流速提升的过程，所以，我们不妨先了解小试设备不同流速下的测试结果。如图2，流速为12mL/min时，粒子粒径为85nm;流速升至50mL/min时，粒径为73nm。随流速提升，粒径呈现出缓慢减小的趋势，但PDI仍保持在0.1以下。实际上，在细胞转染、动物实验的过程中，对粒径尺寸的要求，往往不会那么苛刻，换言之，在12-50mL/min流速下制备的LNP，后续实验的结果是十分相似的。因此，在小试设备上无需刻意追求高的流速，流速成倍提升带来的粒径变化，通过配方的微调就可以轻松实现。图3. M系列设备（中试）不同流速下测试结果（数据仅部分呈现）现在，小编就具体的介绍一下LNP的中试放大。以图2中12mL/min的流速为例，此时LNP粒径为85nm,如图3，在铭汰MicroFlow™系列的中试设备上，从90至240mL/min的宽流速范围内都重现了此数据，成功的实现了工艺的无缝放大。放大过程中的核心因素是什么呢？是流速的准确把控吗，不是的，流速的准确并非难点，较容易达到。小编认为是芯片的核心结构，如图4，早在10多年前就有研究者对类似微流控结构的通道进行过大量的混合模拟，不同结构的通道内，流体的混合方式、混合程度是有很大的区别的。因此，保持芯片的核心结构，适当的拓宽通道尺寸，才能更大程度的减少放大过程中的不确定性。图4.不同结构通道内的混合模拟铭汰MicroFlow™全系列的设备，均匹配了相同核心结构的芯片，相似的流动模型、更低的不确定性，切实的保障了中试放大的稳步可行。参考文献：[1]G Xia, J Li, X Tian, & M Zhou. (2012). Analysis of flow and mixing characteristics of planar asymmetric split-and-recombine (p-sar) micromixers with fan-shaped cavities. Industrial & Engineering Chemistry Research, 51(22), 7816–7827.铭汰Microflow ™系列微流控纳米药物递送平台提供 CRO 服务，协助客户开发配方、包裹APIs筛选载体类型                           建议更优载体测试配方可行性                         提供商业实验级试剂盒（成熟配方）

会议介绍：在过去几十年里，从被质疑到成功用于临床，尤其是新冠疫情大爆发推动了疫苗的快速开发，mRNA疫苗已在疫苗研发历史上留下了浓墨重彩的一笔。而更令人期待的是，新冠mRNA疫苗并不是RNA疗法的单独的“用武之地”，在肿瘤治疗中mRNA疫苗也开始显露头角。在2021年，全球有超过600个RNA疗法处于开发阶段。基于市场不断加码，更是加速了RNA疗法发展的新浪潮。会议时间8月16日-17日会议地点广州翡翠希尔顿酒店会议日程：展会宣传画面：铭汰展位：B12此次会议铭汰将携带样机和、技术资料和视频，向您展示纳米药物递送系统制备、生产及检测服务整体解决方案。现场更有专业工程师与您探讨交流技术难点及实验步骤。铭汰Microflow ™系列微流控纳米药物递送平台提供 CRO 服务，协助客户开发配方、包裹APIs筛选载体类型                           建议最优载体测试配方可行性                         提供商业实验级试剂盒（成熟配方）

上一期的内容，我们介绍了如何制备核酸脂质纳米粒（LNP），对于熟悉此领域的研究者来说，制备过程已非难题，铭汰公司的微流控设备可给与足够的支持与帮助。本期我们重点来聊一下LNP的小试工艺开发。LNP具有广泛的应用领域和显著的治疗优势，依然是诸多药企竞相追逐的热点。其制备过程虽较为简单，但小试工艺的开发却是一个系统性的过程，也是掌握大量基础数据的重要阶段。因此，立项及开发过程都要为此阶段预留足够的时间。下面，小编就浅谈一下对开发过程中几个方面的理解。１. 原料把控原料的质量控制为小试工艺的源头，核酸脂质纳米粒的原料主要为两部分：脂质体和核酸。在小试阶段，原料若以外购为主，选择固定的外购渠道，以防止原料供应差异造成的实验数据异常。若所有的原料都为自产，人力物力的耗费会非常大，也不是一种普遍可行的方式。从长期来看，在诸多类型的原料中，离子型脂质和核酸的确有自我开发的必要性：一是外购成本高，二是原料本身的差异化需要。 图1.RNA模型我们以mRNA的供应为例，在制备时，首先是要提取病毒刺突蛋白的DNA序列，然后构建带有该序列的DNA质粒，接着经过扩增、纯化、质检等诸多过程形成DNA原液。DNA原液还要经过复杂的体外转录（IVT）过程才能得到我们需要的mRNA原液。工艺过程的复杂性决定了其价值链较高的位置，也解释了批次间差异的原因，而mRNA序列的细微调整则会影响其实际效用。因此，在原料把控阶段，核心成分的灵活设计与成本预算是需要平衡考虑的问题。2. LNP制备准备好所有的原料之后，就可以进行LNP的制备。其制备过程，在上一期中已有详述，铭汰的工程师也会进行全程的指导，在此就不重复介绍。3. 细胞／动物实验完成后处理的LNP可以进行细胞转染实验，通过细胞内的荧光强度判断LNP的转染效果。如转染效果较好，可进一步实施动物实验，通过判断动物症状的改善情况来评价LNP的实际效用。图1.RNA模型4. 工艺优化在小试工艺开发阶段，出现一次、两次、甚至多次的细胞转染／动物实验失败都是很正常的情况。科学的进步，对未知的探索均是在失败中总结经验，优化前行的一个过程。举例来说，如LNP细胞转染不成功，可从多方面进行问题分析，如果LNP的粒径适中、PDI较小、包封率较高，则证明其合成步骤是没有问题的，那么问题就出在原料准备或后处理阶段。阳离子脂质是否需要更换，各成分的占比是否需要调整，核酸能否正常翻译表达，后处理过程粒子状态是否发生变化？这一系列的问题的探究实际上就是工艺优化的方向。深入对客观真理的探索，做好实验数据的分析，减少无必要实验的数量，相信定会向小试工艺开发的成功更近一步。小结：LNP小试工艺的成功开发是后期中试放大及未来商业化生产的首步，在此阶段，耗费较低的成本即可获得大量的基础数据，相信广大的研究者也会充分重视此阶段。当LNP的开发走上快节奏的赛道，大量的基础数据定会帮助研究者们在此赛道上走的更稳。铭汰Microflow ™系列微流控纳米药物递送平台提供 CRO 服务，协助客户开发配方、包裹APIs筛选载体类型                           建议更优载体测试配方可行性                         提供商业实验级试剂盒（成熟配方）

免费DEMO 助力科研为感谢广大科研工作者对铭汰医药设备的支持与信任，并鼓励使用国产纳米药物制备仪器发表高质量文章，铭汰特此推出“免费DEMO服务，助力科学研究”活动。提供制备仪器和配方指导。同时，铭汰也可提供成熟商业化试剂盒，加速研发效率。铭汰FlowOrigin M试剂盒铭汰医药专注于纳米药物制备及递送技术，提供一站式整体解决方案。通过微流控芯片技术实现药物递送、纳米颗粒包裹。可包裹材料有：化药、mRNA、siRNA、DNA等有效物质，实现该物质的高效递送，从低通量至高通量均可覆盖，适用于临床前研究和符合GMP的临床生产，并可在纳米颗粒表面添加标记物制造靶向药物。目前，铭汰已服务国内多家知名药企并具备成功申报临床的案例。铭汰医药为科研工作者和企业提供量身定制的纳米药物递送系统制备、生产及检测服务整体解决方案。囊括纳米药物研发过程中，从处方筛选到制剂表征的全线过程。为客户制定优化的配方和工艺参数，制备个性化脂质和聚合物纳米药物，简化流程，加速用户的药物研发进程。活动时间2022年8月1日至10月31日活动流程1. 联系铭汰工作人员，确认实验细节，如有需要，铭汰可提供配方指导；2. 准备配方材料，将样本寄送至铭汰；3. 进行合成实验后，铭汰提供相关数据（PDI、粒径检测报告）；4. 合成后样本，到付寄回给老师，铭汰提供相应后处理方法；5. 如有撰写论文需要，铭汰可提供具体参数、设备名称等信息的中英文描述。 发论文，赢奖金规则  1无影响因子及国内期刊，奖励￥300元京东卡或现金  2影响因子0 奖励￥500元京东卡或现金  3影响因子 5≤IF＜10，奖励￥1000元京东卡或现金  4影响因子 10≤IF＜25，奖励￥2500元京东卡或现金  5影响因子 25≤IF＜35，奖励￥3500元京东卡或现金  6影响因子 IF≥35，奖励￥5000元京东卡或现金  兑奖须知  1兑奖时，请提供PDF电子版文档和发表文章链接，并在文中显著标注铭汰产品或技术引用部分。  2发表文章后，请邮件发送至铭汰官方邮箱：info@mtmicroflow.com  3我司将对信息进行审核（7个工作日）  4将以代金卡券或现金形式发放* 解释权归铭汰医药设备（上海）有限公司所有

mRNA疫苗的上市，不仅有效的缓解了疫情，更是打开了LNP研究领域的大门。越来越多的研究表明，LNP在基因编辑、肿瘤治疗等诸多方面存在着巨大的潜力。而对于想进入此领域的研究者来说，最关心的问题莫过于如何制备LNP？1.原料准备铭汰公司的微流控设备可以用来合成LNP。在合成之前，只需要准备好适当的原料。原料分为两部分：水相和有机相，水相里面包含缓冲液和核酸，如柠檬酸钠缓冲液和mRNA。有机相为各种脂质的混合物，实际上，多为四种类型的脂质混合物：阳离子脂质、中性脂质、胆固醇和PEG脂质。图1展示了多种LNP药品的真实配方，四种脂质的摩尔占比也有呈现，对于刚进入LNP领域的研究者来说，有着很好的参考价值。图1. 三种mRNA-LNP药品信息2.N、P比计算使用微流控设备合成样品时，需要进行配方参数的设定，其中流速比的设定非常关键。流速比可以理解为水相和有机相的消耗量之比，那么设定为多少最为合适呢，这里我们就要先引入一个概念，叫做N、P比。图2.LNP模型图核酸分子具有大量磷酸根（P），显负电；阳离子脂质具有可电离铵根(N)，显正电。两者可通过静电吸附的方式结合在一起，不合理的比例可能会导致粒径过大、稳定性差等缺陷。所以流速比的设定，主要是为了满足合适的N、P比。N、P比的计算也较为简单：假设已知水相：有机相流速为3：1，N的物质的量=阳离子脂质摩尔浓度×1份体积（阳离子脂质仅含单个可电离铵根），P的物质的量=单核苷酸的近似摩尔浓度×3份体积，二者物质的量之比即为N、P比。从图1中也可以看到，较为常用的N、P比为6，当然，此数值并不固定，可根据具体实验进行灵活调控。了解了N、P比的计算，我们也就不难知道：确定N、P比之后，水相和有机相的浓度决定了微流控设备上流速比的设定；也可以先确定N、P比和流速比，进而确定两相的浓度。3.后处理假设在合成LNP时，流速比设为3：1，那么在合成之后，样品中有机相体积占比为25%。高浓度的有机相会破坏纳米粒子的结构，影响后续实验的进行，因此，对合成的样品进行及时后处理就很有必要。① 稀释。建议将合成的样品用去钙去镁的D-PBS稀释40倍，稀释后可取1mL左右进行粒径测定，剩余样品执行后续处理。② 超滤或透析。将样品通过超滤或透析的方式去除溶剂，可浓缩为接近稀释前的体积。③ 除菌。浓缩后的液体过0.2μm的滤膜进行除菌，此步骤可在生物安全柜中进行。完成以上步骤后，即得到最终成品，可根据使用者的实际需求稀释成相应浓度，进行后续的动物或细胞实验。看完以上的介绍，相信大家对LNP的制备已经有所了解。与合成环节相比，原料准备与后处理过程同样重要。铭汰公司的纳米药物递送平台不仅提供了全系列的优质设备，同时也提供高质量的数据分析与技术支持服务，为LNP的制备及领域内应用起到真正的助力作用。参考文献：1.Schoenmaker L, Witzigmann D, Kulkarni JA, Verbeke R, Kersten G, Jiskoot W, Crommelin DJA. mRNA-lipid nanoparticle COVID-19 vaccines: Structure and stability. Int J Pharm. 2021 May 15;601:120586. doi: 10.1016/j.ijpharm.2021.120586. Epub 2021 Apr 9. PMID: 33839230; PMCID: PMC8032477.2. Pilkington EH, Suys EJA, Trevaskis NL, Wheatley AK, Zukancic D, Algarni A, Al-Wassiti H, Davis TP, Pouton CW, Kent SJ, Truong NP. From influenza to COVID-19: Lipid nanoparticle mRNA vaccines at the frontiers of infectious diseases. Acta Biomater. 2021 Sep 1;131:16-40. doi: 10.1016/j.actbio.2021.06.023. Epub 2021 Jun 18. PMID: 34153512; PMCID: PMC8272596.铭汰Microflow ™系列微流控纳米药物递送平台提供 CRO 服务，协助客户开发配方、包裹APIs筛选载体类型                           建议更优载体测试配方可行性                         提供商业实验级试剂盒（成熟配方）

自辉瑞/BioNTech和Moderna的2款mRNA疫苗上市以来，mRNA行业拥有的巨大前景已经得到了广泛的认可，诸多企业也已纷纷进军。然而，受限于核酸药物的开发难度，不少企业在研发初期都会遇到同样的问题：如何进行有效的核酸包裹？ 为了给更多的读者提供可借鉴的参考，本期，小编将重点介绍MicroFlow™系列微流控设备，阐述其在核酸药物开发中起到的助力作用！MicroFlow™系列设备MicroFlow™系列微流控设备由铭汰医药设备（上海）有限公司开发，其开发之初就有着长远的设计考虑：依靠独特的芯片技术，使纳米药物早期开发、临床前放大及未来GMP生产实现工艺的无缝衔接。 知识梳理在介绍设备之前，我们先来梳理一下核酸药物制备相关的知识。核酸药物的制备过程包括合成､修饰和递送三个环节。之所以将药物制备为纳米级，是因为在递送环节中纳米级的颗粒更容易透过血管壁和细胞膜等生物屏障；修饰环节则主要依靠配方的调整以及优化；而首个环节—合成环节，则需要借助于专业的设备，铭汰的MicroFlow™系列微流控设备可以合成直径为40-500nm的纳米粒子，其合成粒子的主要类型可参考图1。图1.纳米粒子类型图接下来，小编将分别介绍MicroFlow™系列微流控设备的四款产品。铭汰 Microflow T产品特点：1.Microflow T合成量为25μL~250μL，用于早期大量配方的筛选，可节省研发初期的成本消耗。2.单次制备可在数秒时间内完成，可缩短处方筛选耗时。3.混合过程高度均一且可重复。4.设备根据大量实验确定了较为通用的反应比，降低了试错成本。铭汰 Microflow S产品特点：1.Microflow S合成量为0.5~60 mL，旨在从实验规模上开发变革性药物，可制备少量样品，应用于小动物实验。2.制备速度快，总流速为0.1~50 mL/min，可节省大量时间。3.产物纳米粒子，粒径高度均一且可调；批次间重复性高。4.操作简单，可通过调整总流速、流速比等参数，来合成不同粒径的纳米粒子。铭汰 Microflow M产品特点：1.Microflow M合成总流速可达400mL/min，有效的扩大了实验室合成规模，适用于更大的体内研究，如非啮齿类模型。2.保留核心的芯片技术，产品粒径、PDI与Microflow S设备无差异，实现工艺放大的快速转移。3.所有核心部件均具有高寿命、低故障率等特点；所有相关配件耐用且易更换。4.操作软件终生免费升级，提高适用性。铭汰 Microflow G产品特点：1.合成速率：24L/h（可根据需求定制，提升制备量）。2.承袭 Microflow M 特性的同时，优化设备细节，使其符合 GMP 要求。可进行大规模临床生产。3.使用与Microflow M相同的芯片设计，减少放大过程中的影响因素。4.一次性液体管路，消除清洁负担。读到这里，相必大家对于铭汰的设备已经有了初步的了解。随之可能会产生一个疑问：每一款产品是否都有与之匹配的芯片？答案是肯定的，以Microflow S设备为例，图6即为与之匹配的FlowTech S芯片。其特点为：在合成均一纳米粒子的前提下，能进行多次重复使用，大大的减少了研发成本。图6. FlowTech S芯片图微流控设备已经成为核酸药物开发者们的常用设备，其在合成均一纳米粒子方面有着显著的优势，铭汰公司的MicroFlow™系列微流控设备更是着眼长远，努力为纳米药物研究各个阶段提供解决方案。扫码关注我们电话| 13917147261邮箱| info@mtmicroflow.com网址| www.mtmicroflow.com地址|上海市松江区新桥镇莘砖公路668号207室

课程简介     随着核酸类药物应用逐步拓展、深入和差异化，便利、快速、可靠、具有长远考量的药物制备解决方案的需求越来越多。本课程由相关背景知识引入，从原理、应用、实际结果等方面展示铭汰提供的解决方案。主讲人娄昊爽铭汰医药设备（上海）有限公司应用工程师娄昊爽先生作为铭汰医药设备（上海）有限公司应用工程师，参与大量设备的安装、使用过程，了解客户需求并提供有效及时的反馈，深受客户信赖。根据客户的具体、实际意见，参与开发铭汰Microflow系列纳米药物制备系统，以满足多样、广阔的市场需求。同时，通过参与大量纳米粒子CRO服务实验和与业内专业技术人员的交流，获得丰富的应用知识，致力于协助业内用户拓展应用范围，加速研发进程。铭汰简介铭汰医药设备专注于纳米药物制备及递送技术，提供一站式整体解决方案。通过微流控芯片技术实现RNA药物递送、纳米颗粒包裹。可包裹材料有：化药、mRNA、siRNA、DNA等有效物质，实现该物质的高效递送，从低通量至高通量均可覆盖，适用于临床前研究和符合GMP的临床生产，并可在纳米颗粒表面添加标记物制造靶向药物。目前，铭汰已服务国内多家知名药企并具备成功申报临床的案例。铭汰医药设备为科研工作者和企业提供量身定制的纳米药物递送系统制备、生产及检测服务整体解决方案。囊括纳米药物研发过程中，从处方筛选到制剂表征的全线过程。为客户制定优化的配方和工艺参数，制备个性化脂质和聚合物纳米药物，简化流程，加速客户的药物研发进程。信息速递线上讲座时间：2022年6月27日 19:00-20:00 星期一主题：核酸纳米药物制备/服务整体解决方案讲师：娄昊爽平台：小鹅通/视频号：扫描下方二维码直接进入课堂铭汰Microflow ™系列微流控纳米药物递送平台提供 CRO 服务，协助客户开发配方、包裹APIs筛选载体类型                           优化载体测试配方可行性                         提供商业实验级试剂盒（成熟配方）