除去血中干扰物质的前处理方法

一般来说由于血液的组成比较复杂，其中的许多物质尤其是高等动物的血浆或血清对TAL（LAL）试剂与内毒素反应很强的干扰作用。因此当我们对这类样品的内毒素进行测定时，必须将其中的干扰物质除去后，方可进行检测。

目前作为血浆中的干扰物质主要有：各种蛋白酶抑制剂、内毒素结合蛋白以及纤溶酶原抑制剂等物质，对于比色法由于Xa因子能分解 Boc-LEU-Gly-Arg-PNA 肽链。因此在测定前排除这些干扰物是十分必要的。

除去血中干扰物质的前处理方法主要有以下几种，现分别介绍如下：

（1）稀释加热法：血浆用溶解水进行3~10倍稀释，然后在37 ~ 100℃水中进行加热处理。保温时间一般在5~10分钟；

（2）氯仿提取法：血浆加等量的氯仿振动3小时，然后取上层进行检测；

（3）乙醚处理法：血浆加入乙醚处理并在40℃保温将乙醚去除；

（4）三氟代乙酸法：血浆中加入乙酸调节pH4.0后用K2HPO4调节pH到7~7.5；

（5）表面活性剂处理法：同稀释加热法一样，只是将稀释用水改为表面活性剂；

（6）凝胶过滤法；

（7）碱性处理法：血浆用0.2NNaOH37℃保温10分钟后用HCl中和；

（8）高氯酸法（PCA）或新高氯酸法（New PCA）；

（9）Beads法：将吸附内毒素的特殊树脂放入血浆中，取出后，加入LAL试剂进行反应。

在这些方法中，常用的主要有：氯仿提取法、稀释加热法以及高氯酸（PCA）法和新高氯酸（New PCA）法，其中前两种方法由于内毒素回收率﹑假阳性等问题的存在，因此在测定时需要探讨，而PCA法（New PCA法），由于添加内毒素的回收率好，目前在日本主要用于临床前处理。