一、样品的前处理
1、取0.5ml人血浆(S),按如下方法稀释:0. 5mlS+0.5mID+1.5mlW→2.5mlS5
式中:D为专用的稀释剂;W为专用的细菌内毒素检测(BET)用水;S5为稀释了5倍的血浆,下标数字表示稀释倍数。
2、把装有S5的小瓶置70℃的水浴中10分钟。
3、把经加热处理的装有S5的小瓶用3000rpm离心10分钟,然后吸取上清液(仍记为S5)作 BET。
4、如果不立即作BET,可把经离心的装有S5的小瓶置2 ~3℃冰箱保存,可在3天内作BET。
二、稀释标准内毒素
1、取效价为10Eu的标准内毒素(CSE)一支,开启,加入0. 1mlW溶解,然后用封口膜封闭瓶口。
2、把装CSE的安瓿放在旋涡混合器上强烈混合10分钟得到浓度为10Eu/ml的CSE溶液,记为E10(E表示CSE,下标数字表示浓度)。
3、按下图步骤制备CSE浓度系列:
以上均需在旋涡混合器混合。
制备待测样品
如下图所示:
四、取鲎试剂(TAL)一支,按标示装量加W复溶
五、试管设置与加样
在电脑的“检测”程序上按下述方法设置反应试管,并取反应试管按下表要求加样:
六、检测
把加好样的试管按编号顺序插入检测仪器的反应孔中反应,每支试管在插入反应孔前应轻轻晃动摇匀试管中的内容物。
七、结果处理
1、反应的数据采集、处理、结果表达等均由检测仪自动完成。
2、日常的检测只需要设置编号1,2,9,10,11,12号的反应试管,利用储存的标准曲线即可。
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