人单核细胞诱导DC培养基

人单核细胞诱导DC培养基是为在体外培养和诱导人单核细胞向成熟CD1c+cDC2树突状细胞（DC）亚群分化发育而专门设计的一款含血清培养基套装。该培养试剂盒可在7天内诱导人cDC2（CD11c+ HLA-DR+ CD1c+CD14-）亚群产生，是研究人cDC2分化发育和功能、以及产生人DC疫苗的重要培养系统。

产品特点
针对人单核细胞向成熟CD1c+cDC2树突状细胞（DC）亚群分化发育而设计，效果显著

产品成分

其他本试剂盒未提供但需用的重要试剂

人CD14+单核细胞磁珠分选试剂

完全培养基配制
  (在无菌生物安全柜中，开展以下操作)
  1.在4度冰箱解冻补充因子和胎牛血清，混匀后使用。
注：解冻后的补充因子和血清可放置于4 oC冰箱，在1个月内使用；或者分装至合适体积后，保存于-20℃冰箱，不可反复冻融！
  2.分化培养基配制：将1体积的分化补充因子和10体积的血清加入到89体积的基础培养基中，充分混匀，得到人cDC2树突状细胞分化培养基。如取100ul补充因子和1ml血清加入至8.9ml基础培养基，以此类推。
    成熟培养基配制：将1体积的成熟补充因子和10体积的血清加入到89体积的基础培养基中，充分混匀，得到人cDC2树突状细胞成熟培养基。
注：配好的完全培养基请于4℃保存，且于1个月内使用完毕。

使用说明
（请详细阅读使用说明后再开始相关实验）
  1.使用磁珠分选人外周血单个核细胞中单核细胞（参考所使用试剂盒的说明书），计数。
注：健康供体每1ml外周血中约含有1-3*10^5单核细胞。
  2.D0：使用分化培养基重悬单核细胞，调整细胞密度至1*10^6/ml，按照如下表格所示将细胞铺于培养板：

  3.将培养板置于细胞培养箱，37℃，5%CO2，静置培养。
  4.D3：半量换液。小心贴培养板侧壁用枪尖吸走1/2体积旧培养基，补充加入新鲜分化培养基至初始培养体积（步骤2表格）。
注：完全培养基请恢复至室温后使用，减少对细胞的刺激。
  5.D5：诱导成熟。小心贴培养板侧壁用枪尖吸走1/2体积旧培养基，补充加入新鲜成熟培养基至初始培养体积（步骤2表格）。
  6.D7：轻轻吹打细胞，收集悬浮细胞，即为分化成熟的人CD1c⁺cDC2，可进行后续操作和分析。
注：如需研究特定刺激对DC的影响，可提前加入相应刺激，待D7收集细胞进行分析。

数据展示

图：人单核细胞诱导树突状细胞培养鉴定。磁珠分选的人单核细胞按照上述说明培养，至第6天时，加入100ng/ml LPS刺激，第7天收集悬浮细胞进行流式染色分析。