一抗的要点和技巧如何选择?古朵新闻√

　　一抗的要点和技巧如何选择?古朵新闻√

　　一抗：

　　第一抗体就是能和非抗体性抗原(特异性抗原)特异性结合的蛋白。种类包括单克隆抗体和多克隆抗体。第一抗体就是平常所说的抗体，即能和抗原特异性结合。

　　一抗：可以特异结合底物，就是识别出我们想要检测的东西。一抗和底物结合与否用肉眼是看不出来的。二抗：可以和一抗结合，并带有可以被检测出的标记(如带荧光、放射性、化学发光或显色基团)，作用是检测一抗。如果一抗自己带有可以被检测出的标记(如带荧光、放射性、化学发光或显色基团)，则不需要二抗。但这样成本很高，因为一种一抗只识别一种底物。所以如今的设计一般是二抗带上可检测标记，再来检测一抗。而一抗识别底物。这样，当一抗结合到底物上，就可以通过二抗检测出来。

　　单克隆和多克隆抗体的选择。由一种克隆产生的特异性抗体叫做单克隆抗体。单克隆抗体能目标明确地与单一的特异抗原决定簇结合，精que地命中目标一样。另一方面，即使是同一个抗原决定簇，在机体内也可以由好几种克隆来产生抗体，形成好几种单克隆抗体混杂物，称为多克隆抗体。在抗原抗体反应中，一般单克隆抗体特异性强，但亲和力相对小，检测抗原灵敏度相对就低;而多克隆抗体特异性稍弱，但抗体的亲和力强，灵敏度高，但易出现非特异性染色(可以通过封闭等避免)。

　　应用范围的选择。有的一抗只能用于 WB ( Western blotting)或免疫组化、免疫荧光、免疫沉淀等;甚至表明石蜡切片或冰冻切片。

　　种属反应性的选择。这一点很重要，表明这种抗体可能存在种属差异，且这种抗体适合检测哪种种属动物体内的抗原。

　　种属来源，一般兔来源的多是多克隆;而小鼠来源的多是单克隆，但也有另外。根据此来源来选择相应的二抗。

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　　一抗和二抗

　　经常产生抗体用于研究。它们根据其结合能力和用途分为初级和次级。

　　可以与特定蛋白质或感兴趣的生物分子结合的抗体称为一抗。以大鼠、小鼠、山羊和兔等动物为宿主，以单克隆 (mAb) 或多克隆抗体 (pAb) 的形式生产一抗。

　　MAb 或 pAb 各有优缺点，在选择一抗之前需要考虑这些优缺点。

　　MAb 由动物的单个 B 细胞克隆产生，因此仅针对抗原的一个表位。

　　PAb 由动物的多个 B 细胞克隆产生，并且具有针对抗原的几个表位的抗体的异质混合物。

　　MAb 非常适合相同的生产和标准化实验，并且产生的背景染色最少或不产生背景染色。在使用 mAb 时，与不需要的蛋白质发生交叉反应的可能性也降低了。

　　由于 pAb 可以结合单一抗原的多个表位，因此它们能够识别抗原中的微小变化。它们还产生更强的抗原检测信号。因此，它们非常适合涉及变性蛋白质的实验。

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