UHPLC是一种专门的色谱方法，与 HPLC 相比，它运行速度更快、分辨率更好并且使用的溶剂更少。UHPLC 通过使用填充较小颗粒（通常直径小于 2 µm）的较小色谱柱来实现这一点。生物化学、细胞和分子生物学、临床医学和许多其他领域的研究人员依靠 UHPLC 从混合物中分离不同类型的分子——无论这些分子是蛋白质、肽、代谢物、药物化合物还是其他化学物质。   尽管 UHPLC 的性能明显更好，但它并不总是zui佳选择。在您考虑改用 UHPLC 时，恒谱生将帮助您区分重要和不重要的内容。  一、为什么选择 UHPLC？  尽管 UHPLC 和 HPLC 在各种情况下都有优势，但如果您在五分钟内分离两种组分并且每天只进行几次分析，则不太可能需要 UHPLC，因为 HPLC 的分离度既足够又相对快速。  即使您不需要更高的分离能力，UHPLC 仍然可以提高您的通量。与 HPLC 色谱柱相比，uhplc更高的色谱分离度可用于提高复杂样品的分离能力，或通过使用更短的色谱柱并保持分离度来提高分析速度。   二、然而，UHPLC 并非没有缺点。由于 UHPLC 在色谱柱中使用较小的颗粒，因此不适用于脏污或未过滤的样品。使用未过滤的样品可能会导致色谱柱堵塞。可以使用恒谱生在线过滤器或者保护柱安装在柱前进行过滤，避免色谱柱堵塞。通常，UHPLC 需要更高的样品和流动相清洁度，这会增加溶剂和样品制备的额外开销。   三、选择 UHPLC 的注意事项  因为 UHPLC 在色谱柱内使用较小的颗粒，例如，需要更大的力来驱动溶剂和样品通过色谱柱。因此，UHPLC 需要能够在比 HPLC 中使用的泵更高的压力下工作的泵。  另一方面，虽然 UHPLC 系统的初始成本通常高于其对应的 HPLC 系统，但总体拥有成本实际上可能更低。与 HPLC 系统相比，UHPLC 系统可以用更少的试剂产生更快的结果，并且增加的通量可以提高生产力。在这种情况下，UHPLC 系统较高的初始成本实际上可能会在几年内节省实验室资金。  四、未来发展  尽管存在差异，但新型柱填料开始模糊 HPLC 和 UHPLC 之间的界限。例如，对于 HPLC 和 UHPLC，新的“核壳”或“多孔”颗粒提供比传统柱颗粒更好的性能。核壳颗粒具有更大的表面积，这意味着它们在较低的工作压力下优于传统的颗粒表亲。这意味着使用核壳颗粒（例如来自恒谱生的核壳颗粒填料，批次稳定性一致，可重复利用），现在可以使用 HPLC 的较低压力实现 UHPLC 的“超”效率。  对于 HPLC 和 UHPLC，平衡设备成本和性能变得更加灵活。无论您需要简单的高通量分离还是更高的分离能力，UHPLC 都在不断发展以满足比以往更多类型的需求。

 一、分离模式  选择色谱柱的首要任务是选择分离模式。分离分子的方法有很多，其中应用最广泛的包括反相、正相、亲水相互作用、离子交换和尺寸排阻 HPLC。还有一些不太常见但更专业的分离模式，例如使用手性固定相或流动相的特定手性色谱。  反相色谱柱通常用于非极性或弱极性有机化合物，它包含非极性固定相（如 C18），通常与极性流动相配对。恒谱生C18 AQ 反相色谱柱在百分百水下拥有超越同类产品的寿命，适于极性较大的物质在高水相条件下的分析。但是该方法不适合应用于蛋白质，流动相通常含有低 pH 值的乙腈或甲醇，可能会使蛋白质变性，因此会产生伪峰或导致蛋白质聚集和色谱柱堵塞。   二、柱长  确定分离模式和色谱类型后，请考虑色谱柱长度。理想的柱长在某种程度上取决于您的特定样品和分离模式。一般来说，更长的色谱分析柱需要更长的运行时间，但会产生更好的分离效果。柱长（有时称为“床高”）对于根据大小分离蛋白质特别重要。  三、填料的大小和类型  HPLC 柱床由直径通常为 2 至 10 μm 的球形功能颗粒构成。小于 2 μm 的粒径用于UHPLC，超高压液相色谱是在非常高的压力下运行，因此它使用比 HPLC 更小的颗粒。恒谱生2μm硅胶基质色谱填料，孔分布均匀、抗压强度高，由于表面羟基活性高所以在中高压情况下能达到快速分离纯化的效果。一般而言，较小的粒径可提供更高的分离率——但需要注意的是背压也更大，以便将流动相泵入密度更大的色谱柱。   三、色谱填料的材料  常见的选择有二氧化硅、羟基磷灰石和交联聚合物树脂。常见的疏水烷基链有 C4、C8 和 C18 等长度。通常，该材料对目标分析物具有一定程度的选择性——做出这种选择对于优化分离度很重要。例如，C18 更常用于分离肽或小分子，而 C4 更适用于蛋白质。  技术发展也产生了新的粒子类别。一种称为表面多孔颗粒 (SPP) 或核壳颗粒的新型二氧化硅基材料有望实现通过2 μm的粒径实现更高的分离效率。通常，常规粒径小于 2 μm 的 HPLC 色谱柱需要专门的 UHPLC 泵或系统来处理较高的背压。与球形和全多孔的传统二氧化硅颗粒不同，SPP 颗粒由一个实心二氧化硅核组成，其上覆有多孔二氧化硅壳，这些颗粒的优点是它们表现出像 2 微米颗粒一样的效率，颗粒尺寸从 2.6 微米及以上，但在略高于一半的背压下运行。

  将色谱柱保持在zui佳状态将大大有助于改进和标准化您的分离操作，同时确保色谱柱的使用寿命。您可以采取以下措施来实现这一目标。  一、注意清洁。如果您从一开始就注意并定期清洁，那么色谱柱 的使用寿命会更长。清洁色谱柱所需的溶剂、酸或碱的类型取决于它们的设计和吸附剂的具体类型。虽然有些色谱柱需要使用氢氧化钠，但该溶液会损坏其他色谱柱中的吸附剂。请按照色谱柱的说明书进行操作。   二、储存条件也很重要。很多人没有考虑如何存储液相色谱柱，细菌会在缓冲液的中性环境中成长。通过水流过色谱柱来防止细菌生长，然后将色谱柱放入抑菌溶液中，例如含有 20% 乙醇的溶液中，并放入4℃到 8℃的冰箱中。  三、恒谱生建议您在第yi次使用色谱柱时注意其背压。如果背压随着时间的推移而上升，则说明您清洁得不够充分。  四、先过滤。如果您将异物颗粒和污染物拒之门外，可以让色谱柱保持更长时间的原始状态。某些过滤步骤可以去除颗粒延长分析柱的使用寿命。将样品注入到更昂贵的分析柱本身之前，先通过色谱保护柱过滤。这样做不仅可以保持分析柱清洁，还可以浓缩样品，这意味着您可以使用更多的样品，从而获得更好的灵敏度。  五、恒谱生色谱保护柱作为过滤器或捕集柱，能够截留微粒和其他污染物。虽然这会额外增加一些成本，预算会受到影响。但是这对损坏色谱柱造成的损失可以说不值一提。分析保护柱作用为预先拦截将被色谱柱牢固吸附，不能被流动相所洗涤的物质。分析保护柱的填料通常使用与色谱柱相同之物，这是由于分析柱的损伤在多数场合只是分析柱入口侧的一小部分填料。恒谱生建议您可以有效地利用分析保护柱，以延长色谱柱的寿命。  六、无论您的研究预算是大是小，当您选择最适合您的蛋白质样品和目标的规格的色谱柱（预装的或自制的）时，您的蛋白质分离将有zui大的成功机会。在此过程中处理所有细节，包括保养和清洁您的hplc色谱柱，将支持您实现重要发现的使命。

 首次将 UHPLC 用于小分子分离时，能得到很好的峰形，但是蛋白质峰的分离几乎没有那么好，因此通常不可能显着缩短运行时间。然而，最近对蛋白质进一步改进让UHPLC 可以提供更好的分离度和更短的运行时间。虽然 UHPLC 不能让科学家始终看到蛋白质之间的所有差异，但它可以让他们看到一些差异——例如，在大体形态、二硫化物异构体、脱氨基作用和蛋白质折叠方面。蛋白质研究人员使用不同的色谱模式来实现这一目标，例如反相色谱 ( RPC )、离子交换 色谱( IEX ) 和尺寸排阻 ( SEC ) 色谱。    为了成功分离出蛋白质的细微变化，可以通过仪器控制在储存和分离过程中具有生物相容性和准确的温度控制来保护脆弱的蛋白质样品免受外部因素的影响。许多蛋白质研究人员在质谱 ( MS ) 分析之前使用超高效液相色谱技术分离蛋白质。这可以很好地工作，具体取决于 UHPLC 分析的模式。  色谱填料改进的粒子技术也对提高蛋白质分析有着显著推进作用。传统上，UHPLC 对小分子的定义特征是直径小于 2 微米的全多孔颗粒柱。但是，这些对较大的蛋白质效果不佳，因为它们会导致背压增加、液相色谱柱堵塞和其他仪器维护问题。对于这个问题，改进的色谱填料采用核壳颗粒（也称为表面多孔、几何结构、融合核或混合颗粒）由被多孔外层包围的实心球形内层制成，可提高 UHPLC 的分离效率处理更大的蛋白质。   恒谱生USHA和USHB系列填料从1.8粒径到200、300甚至更大的粒径都具有很好的重现性、选择性和高分离度的优点。独有的键合方式，可实现百分百水相条件。不管是反相分析还是正相分析，都可以找到合适的色谱柱，能够高效分析维生、类固醇、蛋白质、单糖、多糖、氨基酸等多种物质。   UHPLC 的应用正在扩大，并且越来越多地包括生物治疗药物。核壳颗粒通常用于分离免疫球蛋白， IgG 疗法是当今蛋白质治疗工作的zui大份额。未来可能超高效液相色谱会在核壳颗粒以及研究和生物制药应用方面取得进一步的技术发展。作为化学和生物学的交叉点，用于蛋白质的 UHPLC 已准备好进入一系列有趣的应用领域。

 UHPLC是一种专门的液相色谱方法，与 HPLC 相比，它运行速度更快、分辨率更好并且使用的溶剂更少。UHPLC 通过使用填充较小颗粒（通常直径小于 2 µm）的较小色谱柱来实现这一点。生物化学、细胞和分子生物学、临床医学和许多其他领域的研究人员依靠 UHPLC 从混合物中分离不同类型的分子——无论这些分子是蛋白质、肽、代谢物、药物化合物还是其他化学物质。  尽管 UHPLC 的性能明显更好，但它并不总是zui佳选择。在您考虑改用 UHPLC 时，恒谱生将帮助您区分重要和不重要的内容。  为什么选择 UHPLC？  尽管 UHPLC 和 HPLC 在各种情况下都有优势，但有时 UHPLC 显然是zui佳选择。特别是，UHPLC 提供了更好的分离度，因为它们的柱子颗粒更小。但研究人员并不总是需要这种能力。恒谱生建议您需要考虑哪种分离将在可管理的时间内提供zui佳效率。如果您在五分钟内分离两种组分并且每天只进行几次分析，则不太可能需要 UHPLC，因为 HPLC 的分离度既足够又相对快速。   即使您不需要更高的分离能力，UHPLC 仍然可以提高您的通量。更高的色谱分离度可用于提高复杂样品的分离能力，或通过使用更短的色谱柱并保持分离度来提高分析速度，因此无论是高通量应用还是高分辨率分析，都将从 UHPLC 中获益最多。  选择 UHPLC 的注意事项  UHPLC 在色谱柱内使用较小的颗粒，恒谱生1.8粒径的超纯硅胶色谱填料能够让您的色谱分析效果与速度大大提升。粒径和形状紧密分布，减少背压，批次稳定性一致，可重复利用。因为使用比较小的粒径所以需要更大的力来驱动溶剂和样品通过色谱柱。   UHPLC 需要能够在比 HPLC 中使用的泵更高的压力下工作的泵。另一方面，虽然 UHPLC 系统的初始成本通常高于其对应的 HPLC 系统，但总体拥有成本实际上可能更低。与 HPLC 系统相比，UHPLC 系统可以用更少的试剂产生更快的结果，并且增加的通量可以提高生产力。在这种情况下，UHPLC 系统较高的初始成本实际上可能会在几年内节省实验室资金。  尽管存在差异，但新型柱填料开始模糊 HPLC 和 UHPLC 之间的界限。例如，对于 HPLC 和 UHPLC，新的“核壳”或“多孔”颗粒提供比传统柱颗粒更好的性能。核壳颗粒具有更大的表面积，这意味着它们在较低的工作压力下优于传统的颗粒表亲。对于 HPLC 和 UHPLC，平衡设备成本和性能变得更加灵活。无论您需要简单的高通量分离还是更高的分离能力，UHPLC 都在不断发展以满足比以往更多类型的需求。

  引入 HPLC 色谱柱的样品通常多种多样且复杂，这些样品可能含有许多与 HPLC 条件不兼容的成分。在没有适当的样品制备或样品预处理的情况下注入此类样品可能会导致色谱柱堵塞。比如残留的蛋白质和高疏水性化合物（如脂质）在反相分离过程中也可能不会完全洗脱出来，它们往往会慢慢吸附到色谱柱上并引起问题。   不兼容的样品稀释剂和流动相也会导致堵塞问题。如果两者不兼容，当将样品引入流动相时，如果稀释剂与流动相两者对比极性太强，通常会出现样品沉淀。  流动相缓冲液通常用作 HPLC 中的流动相，重要的是在使用前过滤这些缓冲盐。有时，由于实验室温度的不同，一些缓冲液成分容易沉淀，又或者使用过高浓度的缓冲液也会导致沉淀。  来自磨损的泵密封件或其他密封件的碎片，长期使用总会发生磨损，这些组件往往会在溶剂管路中产生一些碎屑或者金属离子等。如果不对泵和进样口进行定期维护，杂质往往会到达色谱柱筛板并堵塞色谱柱。   现在我们知道了色谱柱被阻塞的问题，我们如何保护它？为了保护 HPLC 色谱柱（分析型和制备型）免受污染，例如进样中的微粒、未过滤的流动相组分或进样器磨损的泵密封/转子密封的碎片，建议使用色谱保护柱。  保护柱本质上是一个微型色谱柱，理想情况下填充与分析柱相同的填料，并连接在分析柱之前。恒谱生有各种尺寸以匹配不同型号的色谱柱的要求。保护柱中的筛板与分析柱中的筛板类似，这意味着任何可能阻塞分析柱的东西都会被保护柱阻塞。然后可以通过简单地更换保护柱或者保护柱筛，从而延长分析柱的使用寿命。   如何挑选合适的恒谱生保护柱？保护柱的填充材料（固定相）应与分析柱的填充材料相同，以使选择性不会发生变化。保护柱的 ID 应与分析柱的 ID 相同或小于分析柱的 ID，以尽量减少增加的谱带展宽。始终使用 ID 最接近色谱柱 ID 的防护装置。保护柱的长度应尽可能短以避免额外的死体积，可以选择恒谱生直连保护柱，直接连接UHPLC和UPLC色谱柱，省去中间的连接管路和接头螺丝，消除溶剂泄露问题与连接死体积，日常操作使用更方便简洁、更易于操作。

 泄漏是 HPLC 分析中的常见问题。为了大限度地减少系统中的泄漏，请尽量选择相同制造商的硬件。如果安装不兼容的接头，分离过程中可能会出现问题，重复连接可能最终导致接头泄漏。如果需要更换，请使用适当的适配器并在实验之前检查所有连接是否泄漏。  色谱柱筛板堵塞是另一个常见的 HPLC 故障问题，想要从一开始就尽量减少此问题，请使用柱前过滤器和色谱保护柱。恒谱生的在线过滤器和保护柱能够过滤掉流动相中的污染物，保护色谱柱免受样品溶液中析出沉淀物的危害。   平时要清洁进样口，首先断开并反转色谱柱，将其连接到泵（但不连接到检测器），并以两倍标准流速向泵送溶剂。大约 5-10 柱体积的溶剂应该足以去除入口筛板上的少量颗粒材料。最终使用标准测试混合物评估清洗过的色谱柱的性能。  恒谱生建议定期更换色谱柱筛板。有时溶剂冲洗和恢复程序都不能恢复色谱柱的性能。如果您已经将色谱柱确定为问题源，并且其他色谱柱的修复程序失败，那可能存在填料中的空隙或入口筛板阻塞。作为手段，打开色谱柱的入口端。注意：打开入口端，尤其是打开出口端，可能会损坏填料床。在打开色谱柱之前，请查阅制造商的文献。   高效液相色谱故障排除。断开色谱柱与系统的连接。为防止填料从色谱柱中渗出，请尽快执行后续步骤。使用虎钳和扳手，或两个扳手，小心地拆下入口端接头。如果熔块留在接头中，通过在硬表面上敲击接头将其移出。如果筛板留在柱子上，请将其滑下而不是提起。这将有助于保持填料床的完整性。  如果是模块化色谱柱可能需要特殊工具来移除筛板盖。检查旧熔块。将筛板压在不锈钢管上会在正确安装的筛板的柱侧边缘周围留下一个环。没有环可能意味着套圈太靠近管端。由此产生的松散连接可能会泄漏二氧化硅或充当混合室。检查填料床。如果它凹陷或断裂，则需要一个新柱。更换滤芯。更换末端接头。用手拧紧，然后用扳手拧紧 1/4 圈。

  作为一名液相色谱工作者，您最关心的还是生成真实实验数据，这些数据可以在任何其他实验室的相同条件下被普遍接受和重现。如果忽视全球公认的规范，即使使用最复杂的工具也无法达到目的。系统适用性是在化学分析中生成有效数据的关键。  液相色谱法，是从事制药、食品、法医学、聚合物、生命科学和环境研究的实验室中应用广泛的技术。数以千计的高效液相色谱仪在全球制药行业的研发和质量控制实验室工作，每天都会产生大量数据，这有助于开发安全有效的药物。在根据此类数据做出决策之前，HPLC 系统应满足系统适用性的要求至关重要。   什么是系统适用性？系统适用性测试是色谱分析的重要组成部分。它们帮助我们确定检测灵敏度、分辨率和重现性是否足以满足所需的分析。美国药典 (USP) 是原料药色谱指南的权威来源。USP 第 621 节规定系统适用性测试是气相和液相色谱分析的一个组成部分。基于这样的概念，设备、电子设备、分析操作和待分析的样品构成一个可以进行评估的整体系统。这意味着除非满足系统适用性的要求，否则不接受任何样品分析。  导致 HPLC 分析中系统适用性失败的因素有很多，恒谱生总结了以下几点：  自动进样器 – 由于无法准确提供设定体积的样品和标准品，精度较差。  色谱柱——老化的色谱柱或堵塞的色谱柱会由于理论塔板数减少而导致性能下降。色谱柱老化的情况有很多，也有存在柱头污染导致色谱柱使用寿命缩短报废的问题。   泵 – 由于操作部件的磨损而无法提供恒定流速的流动相。  流动相 – 制备规定混合物时的错误和脱气不完全。  样品和参考制备 – 制备不准确或注射前未使用溶剂进样口过滤器过滤。样品杂质和流动相杂质一定要去除，否则进入液相系统会造成很多问题。在色谱柱前添加保护柱能够有效预防杂质污染柱头，造成柱头塌陷等问题。   需要多久进行一次系统适用性测试？根据监管机构的指导方针，系统适用性应符合整个色谱系统的要求，而不仅仅是单个模块。每当设备或关键试剂系统发生重大变化时，应在样品注入前进行适用性测试。系统失效时获得的样本分析结果对系统适用性的要求没有意义。 系统适用性必须在所有受监管的测定之前和整个过程中进行。在色谱运行开始时应用适用性测试并假设系统将在运行期间正常运行是不够的。包含主要成分和预期杂质的测试混合物可以在开始时注入并在测试过程中散布。在面临系统适用性失败时，分析人员应立即停止分析。在诊断出问题并采取补救措施后，应重新进行适用性测试。只有在满足所有系统适用性标准后才应恢复实际样品的分析，而不仅仅是失败的标准。

  液相色谱HPLC 在分析研究和质量控制实验室中占有重要地位。与制造过程和研究结果发表有关的重要决定是基于 HPLC 系统生成的数据具有高度可靠性的情况下才能做出的决定。因为HPLC 是一个多组分系统，因此分析结果的准确性和可靠性取决于每个组分的性能水平。恒谱生本文介绍了一些有助于提高结果真实性的建议。  流动相  流动相的主要作用是将注入的样品运送到色谱柱，在色谱柱中分离后将各个组分转移到检测器进行识别和定量。流动相应在分析和HPLC开始前新鲜制备，并且溶剂不能含任何悬浮颗粒。使用溶剂进样口过滤器对溶剂进行过滤，避免杂质进入系统。恒谱生建议进一步使用恒谱生在线过滤器或保护柱安装在色谱柱前后能有效预防系统内产生的颗粒物污染柱子。   流动相溶剂应该彼此完全混溶，并且注入的样品也应该混溶。使用缓冲液作为流动相组件时，切勿让缓冲液在系统内部变干，因为干燥时形成的盐会沉积并阻碍流动相的自由流动以及泵组件的损坏。  样品  大体积进样会导致峰形失真，也会使色谱柱过载。分析实验前需要检查样品与流动相的兼容性。如果溶解度较低，请尝试使用与流动相混合物极性相匹配的溶剂或溶剂组合。  柱子  色谱柱是 HPLC 系统的关键部件。它的正确保养和使用将大大有助于提供高可靠性的结果。操作流速和压力应该逐渐改变，这样这些变化就不会干扰固定相填料。使用恒谱生保护柱还可以防止杂质进入主柱。由于流动相的流量取决于温度，因此强烈建议使用柱温箱以保持恒定的柱温以保持流速的一致性。   泵  在梯度分析的情况下，需要一个泵来根据软件程序保持流动相的组成。通过防止损坏泵部件并在发现任何可见损坏时及时更换此类部件来实现此类条件。视情况允许冲洗中等极性溶剂或纯水，逐渐冲洗泵。  光源  大多数 HPLC 分析可以使用 UV 光源进行。这种光源具有使用寿命。根据供应商的建议更换灯将有助于提高吸光度值的重现性。  探测器  检测器是 HPLC 系统的最终组成部分，可确认不同样品成分的存在并有助于对其进行量化。恒谱生建议定期离线清洁检测器，并在重新使用之前用水和流动相冲洗。切勿超过工作压力范围，以防止可能损坏检测器单元壁。  恒谱生提供的建议会有助于提高结果的质量和准确性，仪器的定期清洗和校准，检查仪器是否正常使用也是非常重要的。仪器昂贵，需要细心使用，一些日常的检查和清洗过程能够有助于延长仪器使用寿命。

  近年来，为减少分析时间和提高分析通量而诞生的超高效液相色谱技术取得了令人瞩目的发展。超高效液相色谱仪器能够承受更高系统压力和流速，并且分析速度和效率大大提升；检测器模块的改进和新的数据处理算法也有效提升信号采集的速率；现代色谱柱技术的发展，即使是很短的柱长也能提供足够高效色谱分离效率，比如恒谱生液相色谱柱有30、50、75、100、150、200、250和300mm等多种长度。高效的分离技术归功于液相硅胶色谱填料，通过恒谱生的先进的技术处理，金属含量极低的99.9%超高纯度球型多孔硅胶在孔径、孔体积、比表面积、碳含量、金属离子含量、峰型对称度等都有统一管理和质量保障。   对液相色谱技术的研究有许多方向，其中提高通量是能够提升液相色谱分析速率的重要研究方向。在标准仪器操作模式下，自动进样器序列发生在每次进样之前。该顺序通常包括将针头移至指定的样品瓶位置、取样、移回进样器阀以及一系列针头清洗以减少样品残留。这种方法有很多限制和操作步骤，可能会增加仪器循环时间，从而降低整体分析通量。  这里介绍一下多次进样技术，同步进样循环样品制备的一个变化是单次实验运行中的多次进样 (MISER) 技术。在 MISER 中，多次进样以与上述相同的方式运行，但数据不是作为单独的色谱图收集的，而是收集在单个数据文件中。这是定性工作的理想策略，其中进样序列中的一系列运行的快速比较可以快速识别样品组中的一般趋势和异常值（即高丰度和低丰度峰）。   MISER 的主要缺点是和每个独特的运行收集单独的色谱图相比，峰量化的难度增加。许多用于定量的软件算法使用特定保留时间（和/或 m/z 值，取决于检测模式）下分析物峰和内标峰之间的面积比较，当多个单独的分离全部完成时，这可能更难合并绘制在单个色谱图上。虽然它仍然可以通过液相色谱图拆分程序或手动处理来完成，但这些策略需要更多的用户交互以确保所有峰都正确匹配。  随着高通量筛选实验中运行次数的增加，整体工作量显着增加。因此，重要的是要考虑正在进行的高通量实验的总体目的，更具体地说，它们是定性的还是定量的，以确定哪种方法最适合减少循环时间。

 使用高效液相色谱 (HPLC) 来分析样品被广泛应用于药物组分分析、食品添加剂测定和环境样品测试等。由于液相色谱柱是许多实验室的核心设备且成本高昂，因此保护柱子免受损坏是延长色谱柱寿命和降低成本的首要考虑因素。维护良好的色谱柱还能产生一致且准确的数据，为可靠的分析结果提供支持。  如何提高色谱柱性能？色谱柱性能取决于多种因素，包括样品特性、不溶性颗粒的存在以及使用后的清洁维护等。但是在使用过程中，并不是所有实验条件都是理想条件。例如，某些样品具有苛刻但必要的 pH 条件。因此，对于液相分析柱的预防性维护程序有助于大限度地延长色谱柱的使用寿命并保持 HPLC 的效率。   哪些因素会影响色谱柱寿命？常见的 HPLC 问题包括柱背压升高、泄漏以及无法保持一致的流速等。来自未过滤样品或流动相的颗粒会导致这些问题出现，任何进入 HPLC 系统的物质都存在将颗粒物质引入色谱柱基质的风险，从而可能缩短色谱柱的使用寿命。因此，样品一定要进行预处理，流动相需要用溶剂过滤器进行过滤后使用。   对流动相进行过滤和脱气将去除颗粒和溶解气体，确保它们不会到达并损坏色谱柱。如果流动相含有来自溶解固体材料的缓冲盐或改性剂，则过滤尤为重要。在泵的低压进样口侧使用的恒谱生HPLC溶剂进样口过滤器有助于保护止回阀、进样器和色谱柱免受有害颗粒污染物的破坏。将此步骤添加到日常工作中有助于降低色谱图中的基线噪声。  使用在线过滤器和保护柱也有助于防止颗粒进入系统和色谱柱。色谱柱是 HPLC 系统中的关键组件，这些色谱柱保护器的使用取决于应用，需要一种或两种。恒谱生色谱保护柱是一种短柱，样品和流动相在进入主柱之前通过它，有助于去除杂质和悬浮固体，防止它们到达分析柱。保护柱的使用取决于具体的应用，当色谱行为发生变化时，例如背压、保留时间变化或峰展宽时，需要定期更换保护柱。   实验中也需要考虑样品与流动相的兼容性，因为某些样品成分会与特定的 HPLC 溶剂发生反应。例如，醛和酮与氨基流动相反应。避免反应性组合有助于保护色谱柱免受损坏。  更多液相色谱相关资讯，关注恒谱生为您解惑！

 样品过滤是制备色谱分析样品的关键步骤。实验前如果不过滤样品会导致色谱柱筛板堵塞等问题，从而导致背压增高和色谱柱性能下降。最终，这会增加花在色谱仪故障排除和维护上的时间，浪费时间也增加科研人员的工作量。  对于大多数类型的样品，过滤处理相对比较简单。在进样前用溶剂进样口过滤器对流动相过滤。这一步也非常重要，用色谱过滤头可有效滤除流动相中的固体颗粒杂质；未经过滤的溶剂或溶剂瓶中生长的微生物都会降低液相色谱柱和泵的性能。使用一段时间后需要定期清洗或更换溶剂入口滤头。   在食品和饮料行业分析时，一些浓糖浆、果肉汁和脂肪等具有粘性或含有大量颗粒物样品是比较难过滤的。并且如果你的样品含有玉米淀粉、糖浆、大豆、蔗糖或水果添加剂等成分，使用标准注射器过滤器也是一项挑战。  过滤具有粘性样品时需要注意什么问题？手推动粘性样品通过注射器过滤器时，需要用手大力推，需要使用多个注射器，降低效率；由于玻璃料堵塞可能需要增加泵压力；分析容易出现肩峰或分裂色谱峰等等。  如何更有效地过滤粘性样品？  可以用带有预过滤叠层的针头式过滤器，叠层由超细纤维组成，可在较大颗粒到达指定孔径的过滤器之前将其拦截捕获。这能较高效率处理冗长的样品量。  选择具有正确化学相容性的过滤器也很重要。例如，对水性样品使用疏水性材料会导致背压积聚。选择错误的膜会导致其他性能问题。   恒谱生总结了以下几个HPLC、UHPLC 样品制备注意事项，供大家参考：  对注射器应施加均匀适度的压力，以确保产生一致的样品。如果背压开始产生明显阻力，请检查您的过滤器是否有问题。  如果您遇到过滤背压增高、膜堵塞或由于未过滤的颗粒进入进样器而导致色谱柱性能下降，请考虑使用预过滤叠层。色谱柱性能下降是需要重点关注的问题，平常维护也需要用心。在柱前添加一个保护柱相当于在色谱柱前增加了一段额外的填料，起到了保护整个色谱柱的作用。如果在意增加色谱保护柱可能会引起死体积增大，可以采用恒谱生直联式保护柱套，它可与色谱柱入口直接相连，手紧直联不需要其他的连接管路，也可达到优异的色谱性能，不会增加死体积。   如果使用注射器时有强烈的阻力，请勿强行让样品通过。这样做可能会导致不必要的问题，甚至可能导致过滤器泄漏。  当您有大量样品时，不要自动选择窄直径过滤器。请选择适合体积的直径。  想了解更多色谱相关知识，关注恒谱生，为您解忧！

  药物溶出度仪过滤器是药物质量控制 (QC) 和药物开发中药物溶出测试的重要部件。当样品从溶出容器中取出时，溶出度测试通过测量在特定时间点溶解的活性药物成分 (API) 的量来确定药物从剂型中释放的速度。  过滤在溶出度测试中起着关键作用，药物溶出度仪过滤器的效率取决于未溶解的药物颗粒大小，可以搅拌样品促使药物颗粒溶解。使用过滤器可以有效避免药物颗粒进入管路系统，也能避免因取样高度差异引起的实验误差。  像恒谱生不锈钢溶出度仪在线过滤器对样品无吸附，这对药物分析是非常重要的，并且恒谱生溶出仪过滤器采用新颖的全流过滤器设计确保您的溶出样品的完整性，能提供更高的表面积，延长了过滤器寿命，防止了在取样时发生堵塞。   当然，样品制备和有效的过滤对于获得准确的结果非常有帮助，但是我们在分析中也要注意对于昂贵的分析设备进行保护。下游分析通常通过 HPLC 或 UV-vis 分光光度法进行，因此一些残留的杂质可能会对 HPLC 色谱柱造成损坏和潜在堵塞。  一些杂质可能会污染液相色谱柱柱头，造成填料塌陷，最终损坏色谱柱。一根柱子几千块到几万块不等，使用时也应该注意保养。色谱保护柱是有效保护色谱柱免受化学污染的有效手段，在柱前添加保护柱有效过滤系统内的金属离子和污染物，维护色谱分析柱柱效。   在选择用于溶出度测试仪的过滤器时注意事项有：  多种因素会影响样品过滤的有效性以及后续分析的准确性和一致性。过滤器部分必须考虑使用的溶剂、 API以及您的方法、设备和工作流程。对于 HPLC 分析，化学兼容性和低水平的可萃取物始终是降低新污染物干扰结果风险的重要考虑因素。比如假设化学兼容性不理想，可以使用超高分子量聚乙烯 (UHMWPE) 或聚偏二氟乙烯 (PVDF) 材料的过滤器。

  高效液相色谱法中，对色谱图分析是很重要的。你可以将色谱图看成一个横纵坐标为时间与数据的二维图。固定相则是像海绵一样的柱子，里面很多孔洞让样品流动，由于每个样品物质的吸附能力不同，在色谱图中会有不同的峰形。  保留时间是样品通过色谱柱所需要的时间，你在使用相同的流动相和色谱柱分析同一样品时，出现的保留时间应该是固定的。如果保留时间不同可能是里面有杂质造成影响。  在液相色谱分离过程中，容易出现色谱图中未出峰、一个或者多个峰是负峰、宽峰、双峰、拖尾峰等问题，我们称之为鬼峰。鬼峰来源复杂且多样，主要来源于流动相中残留的污染物，缓冲盐等等。恒谱生鬼峰捕集柱对弱极性和非极性的有机杂质有强烈吸附作用，可以有效消除污染物，避免鬼峰出现对实验造成干扰，大幅度缩短实验时间，从而提高工作效率，还能延长色谱柱和仪器寿命。    如果发生进样量与峰面积不是线性关系的问题，那十之八九是样品在流动相中的溶解度小，导致有一部分部分样品被流动相冲入色谱柱中，沉积在柱入口端。  总之，实验影响的因素是复杂且多样的，做好一些预先准备工作能够预防一些问题的发生。比如在液相柱前添加一个色谱保护柱，能够过滤拦截样品中的污染物或者系统内的金属离子，能够有效避免峰型异常或者柱效不佳，影响液相色谱柱的使用寿命。 

  目前已知的化合物中，80%都需要用高效液相色谱法来分析，它以快速、高效、灵敏度好、分离效率高和适用范围广等特点在各领域成分测定中得到肯定与使用，药典将液相色谱法作为许多成分测定的标准分析方法。  高效液相色谱法是在经典液相色谱法的基础上建立起来的，HPLC的不同之处在于，它需要更加粒径小的色谱填料，更高压力的泵、柱效更好的色谱柱。   粒径更加小的填料意味着能有更高的柱效，但是这样也带来液相系统内部压力增大的问题。系统内部压力高，对泵、色谱柱、保护柱、管路都是一个考验。恒谱生针对如此高压力的液相系统，开发出多款耐高压的色谱耗材，特别是这款2.1#超高压UPLC保护柱预柱（订货号HPDGK-021040-1）能耐15000psi的压力，在如此高压环境下，产品性能优异，不漏液、组件不解体，死体积小。   恒谱生色谱保护柱采用不锈钢材质，高强度且耐腐蚀，适合在一些带有强腐蚀性的流动相中使用，比如四氢呋喃。   液相色谱法的流动相是液体，因此在选择流动相作为样品溶剂时需要多考虑。流动相需要选择色谱级的纯溶剂，流动相和样品一定要互溶，如果溶解度不同，析出化合物会造成严重后果。样品一定要进行预处理，虽然这一步花费的时间多需要处理仔细，但是如果这一步没有做好，后面会对实验结果的好坏起到重要影响。  高效液相色谱法能通过调节流动相组成让样品在色谱柱的保留值和选择性各异，从而达到良好的样品分离效果。如果你是分析高沸点、极性、离子型、大分子化合物都很适合选择高效液相色谱法分析。   近几十年的发展，hplc方法得到了极大地发展，分析方法日趋成熟，在化学化工、环保、环境、药学、制药、中药、食品、海关检测等领域有着优异表现。

  液相色谱广泛应用于各种领域的样品分析测定，其中C18色谱柱可以分析绝大多数的化合物，是一款常用且入门的色谱柱。柱子在使用中，日常的维护和活化该如何去做呢？恒谱生带大家了解！  恒谱生建议在使用一款新的液相色谱柱前，应进行柱性能试验，记录试验条件和结果，作为今后评价柱性能变化的参考。柱效对于色谱柱是一个非常重要的考虑因素，想要分析结果好就一定要好好保养色谱柱，维护它的高柱效。测试时要注意：你的测试环境与条件应该按照色谱柱出厂报告中的条件进行，这样测得的结果才有可比性。   分析样品前要对色谱柱进行平衡，等到基线平稳后再进样分析，一般花30分钟用流动相平衡就可以了。 新液相色谱柱使用前根据自己柱子的特性选择合适的试剂将柱子中保存试剂清洗出来，特别需要注意清洗用的溶剂与保存的溶剂相溶性。  日常使用完色谱柱后，一定要注意清洗！实验分析时如果使用含盐的流动相，结束后需要用含10%的甲醇的流动相冲洗30分钟，洗掉色谱柱中残留的盐，再用甲醇冲洗30分钟。特别注意：不能用纯水冲洗柱子，防止将填料冲塌陷。  新买的液相色谱柱需要活化，不同的柱子活化的方法也不同。举例常用的c18色谱柱活化可以用0.5ml/min流速的甲醇冲洗2小时以上。柱子内有保存液，用甲醇冲洗掉柱中可能残留的其他杂质，以免影响后续分析工作。活化的好处有很多，能排除有机相挥发所产生的起泡。C18柱是键合了c18的，用甲醇冲活化c18柱能使键合更好的排列，更有利于分析测定。柱子在活化时不要接检测器，这样可以避免不必要的化学污染。   hplc色谱柱是比较昂贵的色谱耗材，想要长久的使用下去，日常就需要注意保养。想要延长色谱柱使用寿命，可以选择色谱保护柱，过滤掉系统内部和样品残留的污染物。大多数的反相色谱柱有自己的ph使用范围，像恒谱生反相色谱柱ph范围在2-8之间，尽量不要超过这个范围去使用，避免对柱子造成损伤。

  色谱保护柱在液相分析中是至关重要的，保护柱能够过滤色谱系统内部污染和样品污染，从而达到保护色谱柱的效果。特别是做中药、天然产物、合成物等基质复杂的样品分析检测时，建议使用恒谱生色谱保护柱。因为基质复杂，样品溶解度差异不同，样品析出污染色谱柱的几率大大增大，梯度洗脱时影响更大，使用恒谱生保护柱能够有效过滤污染物，保证实验结果的准确性。   生物样品分析时也建议使用保护柱，它可先于色谱分析柱承受样品的不可逆吸附导致的污染，从而延长分析柱寿命。  既然保护柱这么好，我们该如何挑选合适的保护柱呢？恒谱生带你了解！  根据分析的样品性质考虑，如果你分析某些蛋白质组分，样品对金属离子敏感，选用恒谱生PEEK保护柱比较保险。   如果你的流动相使用到四氢呋喃（Tetrahydrofuran）时必须要用不锈钢材质，甚至色谱系统的所有管路也要替换成不锈钢材质，因为四氢呋喃对peek有相当强的腐蚀作用。   举例说明一些样品特性影响保护柱的选择因素，现在我们讨论保护柱的结构因素。根据结构不同可以分为旋转式、直连式等不同款式的保护柱。恒谱生有旋转式保护柱和直连式保护柱，旋转式的优点在柱套可以反复使用，只用定期更换柱芯。恒谱生旋转式保护柱，使得管路不打结，可以增大摩擦力，方便拆卸，延长分析柱寿命并提高性能，节约成本。   恒谱生直连式保护柱可与色谱柱入口直接相连，手紧直联不需要其他的连接管路，更易于操作。死体积极小，不会对分析结果造成影响。  相对于昂贵的色谱柱来说，保护柱的价格可以说是比较实惠了，且选择可以更换柱芯的保护柱，成本更加低廉。购买一个有品质保障，质量过硬的保护柱，使用寿命长又能保护昂贵的分析柱，一举两得。恒谱生是致力于研发制造高质量色谱耗材配附件的高科技企业，我们的产品出厂严格质检，力保每一个产品都达到完美，期待与客户们建立紧密的战略合作关系，携手共创美好未来！

 经常使用色谱柱进行色谱分析的同学，常常会有困惑，为什么柱子使用一段时间后柱效下降？柱效下降主要是因为色谱柱在系统里受到来自样品或者系统内部的污染，这些化学污染物让柱头塌陷或者柱筛板堵塞，柱效不仅下降还会缩短柱子的使用寿命。  由此可见，避免色谱柱被污染，是维护柱效和延长色谱柱使用寿命的有效手段。污染物从何而来？比如样品带来的污染主要是样品未完全溶解或流动相和样品之间发生反应析出沉淀物。如果是经常对中药、合成物、生物制品进行分析的同学就会深有感触，这些样品基质非常复杂，导致分析柱受污染的几率也会大大提升。   系统内部的污染主要来自仪器部件由于磨损产生的固体颗粒物，比如超高效液相色谱仪在使用过程中，系统压力是非常高的，这样超高压力的环境下，更容易出现部件由于磨损产生出金属颗粒物质。污染不仅让柱头塌陷，还会导致系统内部压力升高，填料变色等问题出现最终影响分析检测结果的准确性。  说到这里，大家明白液相色谱系统里“污染”是非常可怕的，想要避免污染或者减少污染，我们可以使用色谱保护柱，“保护柱”顾名思义，保护色谱柱免受污染，大大延长柱子使用寿命。恒谱生保护柱安装在进样器和分析柱之间，将那些强保留的、不可吸附的化合物截留下来起保护色谱柱的作用。   有些同学可能会担心，我加了恒谱生保护柱会不会增大死体积？如果想要大程度减少死体积，可以选择恒谱生直连式保护柱，可以直接与分析柱连接，这样死体积小，对分析结果不会有影响。不仅死体积小，手紧防护罩（无需工具），更换柱芯也十分方便，易于安装使用，比起更换色谱柱能够大大降低维护成本。   讲到这里，相信大家已经对保护柱的作用有了一个认知。恒谱生专注高质量色谱耗材研发生产，秉持“助力客户，成就员工，共同发展”的经营理念，期待与客户们建立紧密的战略合作关系，携手共创美好未来！

  液相色谱分析在食品分析测定中是非常好的色谱分析方法，高效液相色谱法可以和许多结构仪器的联用能提升检测的灵敏度。  晚期糖基化终末产物( advanced glycation end products AGEs) 是过量的糖和蛋白质结合的产物。它常见于麦芽制品、浓缩乳或一些加工过的食品中。最近研究发现超加工食品（指含有额外的成分，如人工成分，使食物味道更好，储存时间更长）会含有更多AGEs，并且食用超加工食品会导致慢性肾病风险增加。   牛奶及其衍生品奶粉、酸奶等是人们日常生活常见的食品，比如奶粉在生产过程中需要真空加热干燥，在这个过程中，由于牛奶受热易发生美拉德反应。研究发现奶粉中会含有AGEs成分，因此对于AGEs的检测也是保障人们的食品安全健康。  恒谱生简单分享一下奶粉做AGEs检测的色谱分析过程，希望能够帮到大家。仪器可以使用液相色谱质谱联用仪，柱子使用恒谱生USHA C18色谱柱，恒谱生c18柱在选择性，梯度和等度条件都有出色峰形；具有更高的分离度、灵敏度和重现性；更宽的pH耐受性， 适合分析各种类型的化合物。   将奶粉样品进行脱脂预处理后，加入10ml的硼酸钠缓冲液，旋涡混合均匀；然后加入1ml的硼氢化钠溶液，混匀后放置冰箱在4℃的条件下用8h进行还原反应。还原反应结束后加入8mL的三氯甲烷一甲 醇 (2：1，V：V)使蛋白质沉淀，然后经过酸解、过滤、洗脱等程序，收集的洗脱液经氮吹浓缩至干。  食品在生产过程中，会经过各种化学反应，也会衍生出许多化合物。液相色谱作为最广泛使用的分离与分析技术，在生物化学、食品检测分析、医药研究、环境分析、无机分析等领域应用十分活跃。

  中秋佳节刚过去不久，阖家团圆的日子少不了家人们一起品尝月饼这一传统食品。人们赠送月饼礼盒成为人情习俗，月饼取团圆之意，有着阖家欢乐、幸福团圆的意思。月饼需要存储较长时间，保质期一般是两个月，月饼里添加防腐剂和抗氧化剂是不可避免的。国家标准对于月饼防腐剂和甜味剂（糖精钠、安赛蜜）的添加以及含量是有严格规定的，月饼中禁用苯甲酸，山梨酸添加剂，钾盐zui大使用量为1.0 g/kg。但是防腐剂超范围、超限量使用现象仍然存在。   国家标准测定苯甲酸、山梨酸、糖精钠、安赛蜜为高效液相色谱法。除了UPLC仪器，还需要准备分析级纯水试剂，苯甲酸、山梨酸、糖精钠、安塞蜜标准液（浓度均为1.00mg/ml）、还有诸如脱氢乙酸、甲醇、乙酸铵溶液等。流动相选择甲醇+乙酸胺溶液 5+95，色谱分析柱可以选择恒谱生C18柱，具有高极性化合物的保留，高惰性和高耐久性的优点，在高比例水相工作条件下依然能保持较长的寿命。恒谱生USHA C18是一款适用范围广、宽PH值耐受性、分离高效和快速的液相色谱柱。   高效液相色谱的发展对于月饼中添加剂的测定有着积极意义，不仅是月饼，其他食品也要测定里面的添加剂。有人可能会问为什么要测定食品添加剂含量？食品安全问题绐终是广大消费者所关心的根本问题，使用人工合成食品添加剂虽然是为了让食品保质期延长，但是如果不加以监管，随意添加会扰乱食品市场安全，危害国民身体健康。

  明明实验时只分析一种物质，为什么峰图会出现双峰呢？通常情况下，正确的峰型应该是尖锐而对称的，出现双峰应该是实验过程中有错误的步骤导致的。液相色谱出现“双峰”的原因有很多。一般有以下几种原因：高效色谱柱、溶剂、进样量、样品特性和pH值。恒谱生简单介绍其中液相色谱柱、溶剂因素导致出现双峰及解决办法。  色谱柱  如何判断是色谱柱出现问题导致双峰出现呢？操作人员分析单一纯物时，如果每个色谱峰都出现双峰，可以确定是色谱柱头受损或者是柱头污染了。如果是色谱柱正常，进样量少并且色谱峰形为一大峰带一小峰，不一定拖尾，这种情况可能是柱头受堵。可以将色谱柱反过来接，用流动相或其它溶剂冲洗掉堵在柱头的残留物，然后再反过来，一般都能解决。如果反复还是不能解决问题，可能是柱头塌陷的问题。恒谱生hplc液相色谱柱寿命在正确使用时可达2年以上，但是柱子使用一段时间后，可能有一些吸附作用强的物质保留于柱顶造成柱头塌陷，这时可补加填料使柱效恢复。每次使用完色谱柱后，需用洗脱能力强的洗脱液冲洗，以延长色谱分析柱的寿命。   色谱柱头塌陷的原因有很多，比较常见的是色谱泵压力过高，填料压碎产生空隙。除此之外还有诸如装填时压力过低，不密实；流动相溶解填料，造成空隙；色谱柱入口筛板堵塞等原因。恒谱生色谱筛板能有效地拦截样品、流动相或管线及密封件的颗粒物对色谱柱的污染，保护色谱柱和仪器。筛板使用一段时间后，拦截的污染物会堵塞筛板，因此需要定期更换。但是相较于损坏色谱柱，更换一个筛板显得性价比更高，成本更低廉。   溶剂问题  反相色谱流动相多为甲醇、乙腈、水，实验中往往会从中加各种添加剂以改善分离性能。有时候为了样品的溶解性或稳定性加入了一点的缓冲液，但是缓冲液的酸碱性可能会导致样品转化，从而产生双峰现象。可以更换缓冲液或者更换流动相试一试。  影响双峰出现的原因还有很多，比如样品超过柱载量，从而导致二次分配；仪器间隔记录时间太短都有可能造成双峰出现。因此具体情况要具体分析，以上仅供各位色谱工作者参考。想知道更多色谱相关咨询，可关注恒谱生！

  食品安全问题关乎身体健康，一直是市民关心的问题。但是有些人为了谋取私利，将罂粟壳磨成粉添加到食品中去，是大大损害了市民的身体健康与利益。近日云南又有一位凉皮摊主为了增加收入吸引客户，在辣椒油中添加罂粟粉，已经被警方抓捕。  如何判断食品中有没有添加罂粟粉呢？当然，如果你某一种食品特别上瘾，欲罢不能，可能会有添加罂粟粉的潜在风险，但是这毕竟依赖于人的感官。最科学的方法，还是使用液相色谱分析！   罂粟壳的主要成分有吗啡、可待因、罂粟碱、蒂巴因、那可汀等生物碱类物质。其中吗啡、可待因和罂粟碱这3种化合物在罂粟壳中含量较高，可以作为罂粟壳检测的指标化合物。  以下是恒谱生给的一些实验参考步骤，分享给大家！  可以选择用液相紫外检测器254nm来检测；色谱柱可以选用恒谱生USHA C18反相色谱柱来进行分离。恒谱生USHA C18柱具有高分离度和高选择性的特点，在高纯硅胶基质上键合通用的C18官能团，经过恒谱生优化的表面设计，让c18柱比表面积更高、含碳量更高，疏水保留更强，柱效更高，保证更好的分离效果。   吗啡、可待因和罂粟碱这些生物碱很容易在分离过程中与色谱柱里的硅羟基相互作用，导致出现峰拖尾现象。所以在流动相的选择要多考虑、慎重选择，合适的  流动相可以有效解决峰拖尾的问题。  不仅是液相分析过程中需要考虑多方面，在前期采样、进样中也需要细心考虑。比如想要从火锅底料中检测分析罂粟壳成分，但是火锅底料的油脂会对检测造成干扰。因此在前期采样中，要选择含油脂量比较少的底料部分。根据生物碱的特性：在碱性条件下溶于有机溶剂，在酸性介质条件下溶于水，可以采用酸性水溶液提取、脱脂净化提取液，将净化后的提取液调至pH值9以上，用有机溶剂反萃取，这样操作步骤可以去除火锅底料中大量的脂溶性杂质。  液相-紫外，液相-荧光，气质联用，液质联用都可以进行生物碱分析，你可以根据自己实验室的条件来进行操作。

 五十六个民族，五十六朵花，五十六个兄弟姐妹是一家。中国人不仅分为不同的民族，还能按照地域分为南方人，北方人；按照口味分为甜味党，咸味党，能吃辣星人、不能吃辣星人等等。很多爱吃辣星人可谓是无辣不欢，每个人承受的辣味程度也不同。那么微辣、中辣、中辣、变态辣这种等级，是怎么来的呢？  1912年，一位叫做威尔伯．史高维尔(Wilbur Scoville)的美国人率先提出测量辣度的方法。他将自己的姓Scoville作为测量单位名称，缩写是SHU。测量的原理是将被测物一单位的辣椒素溶解到糖水里，然后让几个人一起品味，逐渐增加糖水量，直到无法尝出辣味为止，此时糖水量的总和就是SHU了。   但是到了今天，我们已经有更科学更直观更便捷的测量方法，那就是用HPLC法测量。液相色谱能更精确地测量出辣椒中辣椒素的含量，辣度从几百到几万不等。但是有一种辣椒例外，那就是来自印度的“魔鬼辣椒”，它的辣度可以达到90-105万SHU！  用液相色谱测量辣椒素，需要以下的实验条件：  1、选用规格4.6 mm×250 mm，5μm的C18色谱柱（没有c18柱也可以选其他等效的色谱柱），c18柱是比较通用的分析柱子，90%的化合物都可以采用反相分离色谱法。恒谱生USHA 系列C18色谱柱能满足各种化合物分离的实验需求。不仅是辣椒素分离，对于一些碱性、极性、疏水性、亲水性物质的分离都有相匹配的分析柱，具有高柱效、高分离度的特点。   2、流动相选用体积比为65比35的甲醇-水溶液。  3、进样量：10 μL。  4、流速：1 mL/min。  5、 紫外检测波长：280 nm。  6、 柱温箱温度：30 ℃。    以上是恒谱生给的一些实验参考，辣椒素含量的测定通常是食品添加剂中的测量需求。食品添加剂关乎着国民的身体健康，因此对于食品添加剂的测定一直是液相色谱法的一大应用领域。对不同辣椒辣度感兴趣的话，可以自己测定一下哦！

  液相色谱柱是液相色谱分析的核心，对于填料一直是色谱界研究的热门项目。液相色谱柱的研究可谓是中原逐鹿，竞争十分激烈。液相色谱柱的发展都历经了哪些变化呢？首先是柱子的柱体。从材质上，一开始采用玻璃制作，但是我们都知道玻璃这种东西十分不耐压，液相色谱分析的运行压力越来越高，甚至现在还有超高压液相色谱，用玻璃的柱体是十分不合适的。现在的液相色谱柱的柱管几乎都是用金属制作了。   通常采用不锈钢材质，具有高强度、高硬度的同时，不易生锈腐蚀、适用的温度广泛。恒谱生的液相色谱柱柱管就是采用不锈钢材质制作的。并且现在的液相分析柱变得越来越短，很多色谱工作者采用250mm长度的柱子。柱子要多长，还是根据自己的分离需求去选择，恒谱生提供30mm、50mm、75mm、100mm、150mm、250mm不等的柱管可选，也提供2.1、3.0、4.0、4.6、10、20、30直径的各种空柱管，涵盖了各种分析和制备的需求。   说到了分析柱，就不得不提色谱填料了。早期填料使用过无定型硅胶，后期发明了在玻璃珠表面涂一层硅胶的薄壳填料，这样设计有助于减小范德姆特方程的A项，足足让柱效提高了一个数量级。不过它也有缺点，就是固定相容量小，通常拿来分离低浓度的样品。  提高柱效是一直色谱界研究的热门，后期又开发出全多孔球形硅胶。现在的液相色谱填料重以硅胶为基质的占90%以上，绝大部分为全多孔球形。它也具有很多好处，比如良好的机械强度、容易控制的孔结构和比表面积、较好的化学稳定性和热稳定性、专一的表面化学反应，以及表面含有丰富的硅羟基易于进行化学键合或改性，是一种理想的液相色谱填料基质。恒谱生的填料都是多孔球形硅胶，球形硅胶二氧化硅纯度程度高于99.99%；通过筛选粒径提高优化效率；粒径和形状紧密分布，减少背压；批次稳定性一致，可重复利用；超强抗压性；连续可再生的保留时间能够保证其从实验室到应用过程的工艺放大；拥有适用于各种用途的大批量，能够保证满足加工需求的产品数量。   硅胶好处虽多，但是也有局限性，比如它耐酸不耐碱，科学家们在想各种方法弥补这样的缺点，比如寻找更多的替代材料，又或者是改进硅胶的合成技术。相信未来，更多的新思路、新方法会带来新的开拓。

  经常做蛋白质纯化分离实验的色谱工作者，对于疏水色谱（Hydrophobic interaction chromatography，简写HIC）肯定不陌生，血清蛋白、膜结合蛋白、核蛋白、受体、重组蛋白等化合物纯化都需要用HIC色谱法。HIC在是利用样品分子与固定相的疏水力作用的不同，用流动相洗脱时，各组分迁移速度不同而达到分离的目的。疏水相互作用色谱法具有对蛋白质的回收率高，蛋白质不失活，蛋白质变性可能性小等优点。  疏水作用色谱固定相的非极性比较弱，流动相多采用高浓度盐缓冲液进行梯度洗脱。温和的分离条件，可以避免反相色谱中由于固定相较强的疏水性和有机流动相引起蛋白质的不可逆吸附和变性，因此特别适用于活性物质的分离与纯化。   在进行分析时，需要注意几点：溶液的pH值，pH值的不同对蛋白质纯化的效果也会不同。如果你想要蛋白质洗脱顺利，pH值可以远离其等电点，疏水性减少，蛋白质与固定相配基结合不易，有利于蛋白质洗脱。想要提高层析柱的分离度，可以从提高柱温入手。柱温升高可以使疏水作用增加，吸附能力增加，从而提高分离度。  层析柱分离效果好不好，不仅是这些因素影响，平常的保养以及使用方法也需要注意。使用一段时间后，可以将柱子冲洗一下，将杂质洗掉，避免杂质影响分析结果，比如杂峰的出现。可以在柱前添加一个色谱保护柱，它可以截留样品中一些强残留、强酸性和强碱性物质，防止它们污染和破坏色谱柱中的填料。恒谱生多款色谱保护柱及柱芯适用于不同的色谱柱，匹配到您的各种需求。恒谱生自主研发的2.1超高压分析保护柱，特别适合用于超高效液相色谱，死体积少，无背压，精心设计，省去中间链接的管路和螺丝接头，更利于操作。   疏水相互作用色谱有很多优点，当然也有缺点，比如有的蛋白质在高盐中溶解度降低，所以它的应用能力范围会受到一定限制，比较适合疏水性蛋白质纯化分离。想了解更多色谱资讯，可关注恒谱生！每周定期分享，共同进步！

  液相色谱仪是比较常用的实验室仪器，但即使是经验丰富的“老司机”也容易忽略一些小细节，别小看这些被忽略的细节，很可能会影响你的色谱仪器或者是分析结果！一些小故障也是由于不注重细节产生的，色谱新手也需要注意！  流动相一定要过滤！有些色谱操作者可能会想，我不是用的分析级的纯水流动相吗？为什么还要过滤呢？答案是：新制备好的流动相，在室内静置几天后，容易滋生细菌。特别是南方，夏季炎热更容易滋生细菌污染了流动相！恒谱生建议：流动相即配即用，如果要用间隔时间比较久的流动相，一定要过滤！否则滋生细菌会堵塞色谱柱填料里的孔隙，最终损坏色谱柱。   用什么过滤流动相呢？可以采用溶剂吸滤头（也叫色谱沉子）进行过滤，恒谱生溶剂过滤器主要应用于高效液相色谱或液相色谱流动相过滤，可以防止溶液中的固体微小颗粒、细菌、杂质等污染物进入HPLC系统，过滤头由高品质316L不锈钢制成，适用于大部分溶剂。并且流动相吸滤头也要定期清洗，避免细菌堵塞到吸滤头上，不仅造成再一次污染也会降低产品使用寿命。    避免流动相走空！泵工作时要特别注意避免溶剂瓶内的流动相被用完，否则空泵运转也会磨损柱塞、缸体或密封环，最终产生漏液和泵损坏。发现流动相走空要立即停泵，先把泵里的空气排干净，用纯甲醇作流动相，低流速冲洗整个流路。泵的损坏是不可逆的！切记平时要细心操作，可以设置色谱仪分析时间，定时关机。在仪器运行时要注意观察，压力波动变化是否正常，如果有波动并且发生漏液，多半是密封圈损坏了，要及时更换哦！  说到了流动相走空会损坏泵的问题，就不得不提到要定期清洗泵。含有缓冲液的流动相如果长期停留在泵里，蒸发或者泄漏可能会析出盐晶体，这些晶体会对密封环和柱塞造成损坏。分析结束后需要用纯水清洗泵，在泵里加入维护保养的溶剂。  损坏泵的因素不仅有盐晶体，还有一些在流动相未过滤完的颗粒杂质物质，可以将在线过滤器安装在泵和进样阀之间，可有效的防止颗粒进入系统。恒谱生UHPLC超高压液相色谱在线过滤器能够去除溶剂中的颗粒物，避免它们进入进样器，从而防止堵塞。产品耐高压、不漏液、死体积小、低背压、不易堵、耐腐蚀性好，2.1超高压在线过滤器甚至可以耐15000psi的压力。   今天的分享就到这里啦！想要方便快捷的进行色谱分析实验固然重要，但是有些细节不能忽略也不能偷懒，这也是为了保护液相色谱仪器的使用寿命。毕竟仪器 很贵，且用且珍惜！

  色谱工作者都知道，在液相色谱仪或者高效液相色谱仪工作时，不能有气泡进入系统，否则会出现诸如杂峰、压力波动不稳定和基线噪音等问题。通常对气泡这种问题，要预先进行处理，如果等到气泡进入系统想要处理，可就不那么容易了。  对流动相进行提前过滤和脱气处理，这是一个比较好的解决办法。大家可能会想，我选择实验分析的HPLC级溶剂还要过滤嘛？答案是：还是要过滤的！流动相过滤可以选择溶剂过滤器，过滤掉里面的杂质和避免空气进入系统里。恒谱生溶剂过滤头可有效滤除流动相中的固体颗粒杂质，不会产生气泡，溶剂利用率达99%，避免溶剂瓶剩下过多的溶剂造成浪费。   溶剂过滤头应该要定期清洗，避免杂质堵塞污染了过滤器，杂质堵塞会使得液体流入滤头的速度下降，泵强制吸液而产生真空气泡，不仅产生气泡还会影响产品的使用寿命。  产生气泡的原因有很多种，甚至跟季节还有关系，你知道吗？夏天室温高，沸点低的试剂可能会在这种温度环境下汽化，流动相汽化也会产生气泡的！比如乙醚的沸点就是34.5摄氏度，像南方的夏天室温甚至能达到40℃！色谱工作者一定要注意实验室里的室温，注意保存好试剂！    流通池也是很容易产生气泡的地方，而且一旦流通池存有气泡对基线的影响是很大的。进样时也要注意，用针筒吸样时，要注意将进样针里的空气排除，避免将气泡带入系统内。  今天只是简单分享了部分产生气泡的原因，实验过程中还是要各方面排查问题，发现问题并解决它！想要了解更多液相色谱相关咨询，关注恒谱生，定期为您分享！

  众所周知，无论气相色谱还是液相色谱，我们最终用来分析实验结果的都是色谱峰。最理想的色谱峰长什么样呢？它长得如下图所示，符合高斯分布的两边对称的色谱峰是理想的峰形。   而做色谱分析实验就好像买彩票，不是每次都有理想的实验结果出现的。更多时候，总是会出现一些“奇奇怪怪”的峰型，比如峰拖尾、峰前延、倒峰、宽峰等。为什么会出现这样的情况呢？要针对不同的峰型来具体分析。  比如峰拖尾，这是比较常见的峰型，可能有以下几种原因：     色谱柱如果受到污染，会导致柱效下降，影响分析效果。如果等到发现柱头污染了才来更换，费时费力，甚至可能需要更换新的色谱柱。平常在实验分析时，就需要注意色谱柱的保护工作。先排查是否流动相及样品容易引入的污染。从流动相开始进入系统内部的时候，就要注意杂质的去除。可以采用溶剂吸滤头，放置于流动相溶剂瓶中，过滤各种杂质、化学污染物。恒谱生溶剂吸滤头是过滤溶剂的“好帮手”，可有效滤除流动相中的固体颗粒杂质。未经过滤的溶剂或溶剂瓶中生长的微生物都会有可能损坏泵，恒谱生建议使用和定期更换溶剂入口滤头。     除了溶剂吸滤头过滤杂质可以预防颗粒物进入系统，但是过滤器不能完全百分百的过滤完所有的杂质，为了保险起见可以在色谱柱前添加一个保护柱。恒谱生色谱保护柱安装在进样器和分析柱之间，预先捕集能被分析柱牢固吸附，不能被流动相所洗涤的物质，保护并延长分析柱使用寿命。    好的色谱保护柱装在色谱柱前，还会提升色谱柱的柱效，恒谱生有多种款式的保护柱可供选择，包含了分析保护柱和制备保护柱。恒谱生保护柱对比其他保护柱，能够大大减少柱外效应带来的谱带展宽，减少流路扩散。 色谱柱是色谱分析的“心脏”，它的好坏影响实验结果的准确性。如果还要更保险，可以在进样阀前安装一个在线过滤器，多重保险，才能万无一失。

  提起生物碱，制药的小伙伴肯定不陌生，它是中草药中最重要也zui具有价值的生物活性成分之一。生物碱可分为59种，它们的结构比较复杂，用传统的方法分离效果不佳。高效液相色谱法还没出现之前，对于生物碱的分离纯化一直是学者们的难题。但是，即使使用液相色谱法分离，也会存在许多问题。碱性化合物分析中最显著的难题是峰形拖尾，而且碱性越强的时候，就越容易发生拖尾现象。   恒谱生和你一起探讨一下峰拖尾该如何避免！  1、流动相  调节流动相也可以改善峰拖尾的现象，前期在选择流动相的时候，要考虑流动相pH值的范围。对碱性化合物来说，流动相的pH值对峰形会有较大影响，并且对保留因子和选择性也有很大影响。恒谱生建议如果要分离碱性化合物，zui好选择pH值≤2.5，这样会有比较好的峰形。恒谱生液相色谱柱的ph稳定值在1.5-11不等，适合各种需求、各种分离模式的液相分析。   2、固定相  C18色谱柱是反相色谱分析中经常使用到的色谱柱。但是十八烷基碳链很长，键合的时候空间位阻非常大，导致键合率不高，这样，便会残留大量未被键合的硅羟基。硅羟基在一些反相流动相中，容易解离。由于游离的硅羟基与解离后碱性化合产生的二级作用，导致了碱性化合物峰行出现拖尾现象。因此分析碱性化合物时，选择硅羟基活性小的键合相是获得良好峰形的关键。对于固定相的选择zui好采用99.99%纯度以上的超纯硅胶，金属残留量较低低，使得键合率增加，游离的硅羟基减少。  恒谱生液相色谱柱都采用高纯度的硅胶基质填料，其中USHB C18-BIO专为各种碱性化合物的分离而设计，pH值的耐受范围为1.5-10，金属杂质极低，采取二次封尾的技术。这样做主要是为了进一步降低硅羟基的活性使得分析时可以获得良好峰形。  今天只是讨论了一小部分改善峰形拖尾的解决方式，影响碱性物质峰拖尾的因素不仅仅只有这些，除了以上这些解决手段还可以采取使用三乙胺或者二乙胺这种扫尾剂改善峰形，使用离子对试剂也能够起到增强碱性化合物的保留，解决峰形拖尾的问题等等。

  如果说色谱柱在液相色谱分析中的作用好比人的“大脑”，那么色谱填料就好比我们人的“心脏”。液相分析结果好坏和准确性，与填料有着非常重要的联系。液相色谱填料的种类有很多，主要分为聚合物填料、硅胶基质填料和其它无机填料。其中，硅胶基质的填料被广泛应用于各种液相色谱分析中。  硅胶填料有什么好处呢？硅胶基质纯度高，pH值通常在2-8之间，有些特殊的硅胶键合相的ph值可以稳定在pH1.5-10。同时还具有比较高的比表面积，高比表面积具有较强的保留能力、柱容量和分离度；机械强度大，可以保证在超高压的操作压力下，柱效也能稳定；高强度的微粒使分析柱的反压较低，使用寿命增长。   恒谱生硅胶色谱填料对质量严格监控，有着近乎完美的球形表面和几乎一致的颗粒大小，严格控制因微小粒子的存在而引起的柱压上升问题。高纯度、金属杂质＜10ppm，具有柱效高、高重现性、低柱压等特点。   无论是制备级还是分析级色谱使用，还是反相正相色谱使用，恒谱生都有与之对应的色谱填料提供，粒径范围：1.8、2、3、5、10以及更大的颗粒可选。恒谱生USHA Sil色谱柱采用高纯度球形硅胶填料，可用来分离极性和碱性有机化合物，如维生素、类固醇等；恒谱生USHA NH2色谱柱具有较强的极性可正反两用，氨基官能团提供保留允许在正相洗脱条件下分析极性化合物，可用乙腈和水分析单糖和多聚糖中的有机化合物。   因为采用硅胶的填料，碱性组分（阳离子）与硅胶表面残留硅氧负离子作用会引起色谱峰拖尾现象，可以采用封尾（也称封端）消除或者减轻发生的二级反应。恒谱生大多数色谱柱采取封端或者二次封尾技术，更有效的保证分离的效果与准确性。  总而言之，色谱填料没有jue对的好坏之说，主要还是取决于分析物质，根据分析物质的特点来选择适合的色谱柱与填料类型。