医脉赛科技核酸提取或纯化试剂磁珠法体液DNA提取试剂盒

产品应用：

磁珠法基因组DNA提取试剂盒在胃液样本提取幽门螺杆菌核酸的应用实例见下。

1.标本

快速尿素酶阳性（RUT+）胃液标本35例

2.试剂

①EmerTher磁珠法基因组DNA提取试剂盒；②QIAamp DNA Mini Kit (QIAGEN)。

3.标本核酸提取方法

胃液预处理

取1ml的胃液加入1.5ml的离心管中，加入等量的Tris缓冲液（0.67M，pH7.4），振荡均匀，室温放置2h。13000rpm离心5min，弃上清留沉淀。

EmerTher磁珠法基因组DNA提取试剂盒：

• 经预处理的胃液沉淀中加入700μl 裂解吸附液，混和均匀，裂解细胞6min；

• 加入30μl磁珠悬浮液，振荡混合10min。用磁分离架吸附磁珠，弃上清；

• 加入800μl 洗涤液I 洗涤磁珠，吸附磁珠，弃上清；

• 再次加入800μl洗涤液I 洗涤磁珠，吸附磁珠，弃上清；

• 加入800μl 洗涤液II 洗涤磁珠，吸附磁珠，弃上清；

• 再次加入800μl 洗涤液II 洗涤磁珠，吸附磁珠,弃上清后静置3-6min，去除乙醇残留；

• 加入 100μl Nuclease-Free Water，混和均匀后洗脱5min；

• 吸附磁珠，回收含基因组DNA的洗脱液至另一离心管，进行DNA检测及后续实验。

QIAamp DNA Mini Kit按照说明书进行并改进，具体步骤如下：

• 在沉淀中加入180μl ATL和20μl 蛋白酶K，振荡混匀。将离心管置于金属浴或空气摇床中，56°C振荡2h；

• 从金属浴或空气摇床中取出离心管，进行短暂离心。在离心管中加入200μl AL，振荡混匀；

• 离心管置于金属浴中，70°C 振荡10min，将离心管短暂离心；

• 在离心管中加入200μl 新鲜的无水乙醇，振荡混匀，短暂离心；

• 将离心管中的液体全部转入到Qiagen柱中。8000rpm离心1min，弃去废液，保留柱子；

• 将柱子转入到一个新的废液收集管中，加AW1 500μl。8000rpm离心1min，弃去废液，保留柱子；

• 将柱子转入到一个新的废液收集管，加AW2 500μl。13000rpm离心3min, 弃去废液，保留柱子；

• 将柱子转入到一个新的废液收集管中，最高转速离心1min。将柱子转入到一个新的1.5ml离心管，在生物安全柜中打开盖，晾2min；

• 在柱子中加入100μl buffer AE，盖盖放置5min。8000rpm离心1min，收集洗脱出的液体（含目标DNA）；

• 将收集的含DNA液体重新加入柱子中，盖上盖子放置5min。8000rpm离心1min，收集DNA，弃去柱子；

• 将收集到的DNA分装出2份，每份25μl。将提取到的DNA置-80℃冷冻保存。

4.结果

两种核酸提取方法用于临床标本检测的比较

胃液标本35例（RUT+），分别用上述两种提取方法抽提HP核酸模板，实验反应体系及反应条件见上，荧光定量检测结果如表1和图1所示。比较两种提取方法在测定HP特

异基因及内参基因的差别是否具有统计学意义，采用多元方差分析，Wilks’λ=0.96，F=0.73，P=0.49>0.05，结果表明两种核酸提取方法在检测HP特异基因及内参基因的效果相当，说明两种提取方法在临床标本中的检测能力无显著差别。

两种核酸抽提方法，EmerTher的操作过程简单、时间短，提取效率及临床标本检测能力与QIAGEN相当，在大规模临床标本筛查时应优先选择性价比高的提取方法。