大鼠肌动蛋白α/α-SMA/α Actin单克隆即用型免疫组化试剂盒

Rat Alpha smooth muscle Actin Ready-To-Use IHC Kit

大鼠肌动蛋白α/α-SMA/α Actin 单克隆即用型免疫组化试剂盒

样本类型：PFPE 组织切片 

产品规格: 50T （包含一个对照切片）

保存条件：见下表。有效期 6 个月。

产品组分及规格

背景

Smooth Muscle Actin belongs to the actin family of proteins, which are highly conserved proteins that play a role in cell motility, structure and integrity. Alpha, beta and gamma actin isoforms have been identified, with alpha actin being a major constituent of the contractile apparatus, while beta and gamma actins are involved in the regulation of cell motility. In particular, smooth muscle actin is an alpha actin that is found in skeletal muscle. Actin exists as a ubiquitous protein involved with filament formation that make up large portions of the cytoskeleton. Actin filaments interact with myosin to assist in muscle contraction as well as aiding in cell motility and cytokinesis. Smooth muscle actin is found on smooth muscle vessel walls, gut wall, myometrium, myoepithelial cells in breast and salivary glands. Defects in the smooth muscle actin gene cause aortic aneurysm familial thoracic type 6. Actin isoforms differ slightly in their N-terminus and the sequences of each are perfectly conserved in higher vertebrates. Alpha-smooth muscle actin is abundant in vascular and visceral smooth muscle cells. In addition, it has also been shown that smooth muscle actin appear in stress fibers of fibroblastic cells during pathological situations involving contractile phenomena such as wound healing and fibrocontractive diseases. Multiple alternatively spliced variants of smooth muscle actin have been identified.

别名

alpha sarcomeric Actin; alpha smooth muscle Actin; Actin alpha; ASMA; ASM-A; alpha-SMA; alpha SMA; AAT6; ACTA2; Actin alpha 2 smooth muscle aorta; Actin aortic smooth muscle; ACTSA; ACTVS; Alpha 2 actin; Alpha-actin 2; Cell growth inhibiting gene 46 protein; Growth inhibiting gene 46; ACTA_HUMAN; Actin alpha 2 smooth muscle aorta; Actin aortic smooth muscle; Actin, aortic smooth muscle; Alpha 2 actin; Alpha actin 2; Alpha cardiac actin; Alpha-actin 2; Alpha-actin-2; Cell growth inhibiting gene 46 protein; Cell growth-inhibiting gene 46 protein; Growth inhibiting gene 46; MYMY5.

验证数据

（大鼠肌动蛋白α/α-SMA/α Actin 单克隆 IHC 试剂盒）对石蜡包埋的大鼠结肠组织切片进行免疫组化分析。

石蜡包埋组织的免疫组织化学方案

1. 脱蜡水化

石蜡切片置于新鲜二甲苯中浸泡脱蜡 3 次，每次 15 min；依次置于不同浓度（100%、95%、90%、80%、70%）乙醇浸泡各 5 min，再置于蒸馏水洗涤 5 min，重复 3 次。

2. 抗原修复

沸水浴修复：将 100×抗原修复缓冲液（试剂 2）用蒸馏水稀释成 1×抗原修复缓冲液，放入修复盒中并提前加热至95-100℃（注意盖好以防液体蒸发），然后将切片放入修复盒中，在沸水浴环境中保持外沸状态 15 min，室温自然冷却；用 PBS 缓冲液（试剂 1，将干粉溶解在 2L 蒸馏水中）清洗 5 min，重复 3 次。

3. 阻断内源性过氧化物酶

用吸水纸吸去玻片上多余的液体，用免疫组化笔在组织周围画圈，加入 2-4 滴内源性过氧化物酶阻断剂（试剂 3），室温下置于湿盒中孵育 15 min，用 PBS 洗涤 5 min，重复 3 次。

4. 血清封闭

用吸水纸吸去玻片上多余的液体，加入 2-4 滴封闭工作液（试剂 4），置于湿盒内 37℃封闭 20 min，以减少非特异性染色。

5. 一抗孵育

用吸水纸吸去玻片上多余的液体，加入 2-4 滴 Histone H3 鼠单抗工作液（试剂 5），置于湿盒中，4℃孵育过夜或37℃孵育 1-2 h。

6. 复温

4℃孵育过夜后，室温下复温 15 min（若在室温下孵育一抗，则直接进入下一步清洗）；用 PBS 洗涤 5 min，重复3 次。

7. 二抗孵育

用吸水纸吸玻片上多余的液体，加入 2-4 滴 HRP 标记羊抗鼠 IgG 工作液（试剂 6），置于湿盒中，37℃孵育 1-2 h；用 PBS 洗涤 5 min，重复 3 次。

8. 显色

用吸水纸吸去玻片上多余的液体，在每张切片上滴加约 50 μL 新配制的 DAB 工作液（试剂 7:试剂 8:PBS=1:1:18），作用 3-5 min。显微镜下观察结果，达到合适的显色强度后，用蒸馏水冲洗切片以终止反应，用蒸馏水冲洗 5 min，重复 3 次。

9. 复染

滴加适量复染试剂（试剂 9）复染 3-5 min，蒸馏水冲洗 5 min，滴加盐酸酒精分化约 30 s，蒸馏水洗涤 5 min，重复 2 次。

10. 脱水封片

将玻片依次置于不同浓度（70%、80%、90%、95%、100%）乙醇，各 5 min；然后置于新鲜二甲苯中浸泡脱蜡3 次，每次 15 min。用吸水纸吸去多余的二甲苯，滴加适量封片剂（试剂 10）在组织上，将盖玻片盖在组织上，避免产生气泡。

注意事项

1. 建议检测时进行阴性及阳性对照，以提高实验的可靠性。

2. 本品中的配套试剂，请不要用其他生产商产品替换使用。

3. DAB 为致癌物质，请采取必要的防范措施。

4. PBS 洗涤液（试剂 1）配制后在 4℃可保存一周；抗原修复液（试剂 2）及显色剂（试剂 7 和 8）的工作液需每次实验时现用现配。

特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！