RIPA裂解液（弱）

RIPA 裂解液(弱)

Weak RIPA Lysis Buffer

规格：‍100ml‍

储存条件： 

RIPA 裂解液是一种传统的细胞组织快速裂解液，裂解得到的蛋白样品可用于常规的 Western、IP 等。蛋白样品可用 BCA Protein Assay Kit 测定蛋白浓度。由于 含有较高浓度的去污剂，不能用 Bradford 法测定 RIPA 裂解后的蛋白浓度。RIPA 裂解液有 多种，根据其裂解液的强度大致可以分为强、中、弱三类。可参考说明书中“各种裂解液主 要特点、差异和选择”选择合适的 RIPA 裂解液或其它裂解液。 

本产品为 RIPA 裂解液(弱)。含有 PMSF(100mM, 100×)一支。

本产品仅用于科研领域，不用于临床诊断。 

使用方法： 

(一) 贴壁培养细胞

1. 取 Weak RIPA Lysis Buffer 置于室温溶解混匀后，加入 PMSF 使终浓度为 1mM。

2. 去除贴壁细胞的培养液，低速离心，弃上清。

3. 按照 6 孔板每孔加入 150～250μl 含有 PMSF 的裂解液的比例， 加入 Weak RIPA Lysis Buffer。移液器轻轻吹打，使裂解液和细胞充分接触。置于冰上或 4℃裂解，通常裂解液作用于细胞 1～3s 内，细胞就会被裂解。

4. 4℃离心（如无低温离心机，室温下离心亦可），取上清。

5. 进行后续的 SDS-PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。

(二) 悬浮培养细胞

1. 取 Weak RIPA Lysis Buffer 置室温溶解混匀后，使 PMSF 终浓度为 1mM。

2. 低速离心悬浮细胞，弃上清，收集沉淀。

3. 用手指轻弹细胞，使其松散。按照 6 孔板每孔细胞加入 150～250μl 含有 PMSF 的裂解液的比例，加入 Weak RIPA Lysis Buffer。

4. 4℃离心（如无低温离心机，室温下离心亦可），取上清。

5. 进行后续的 SDS-PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。

(三) 组织样本

1. 取 Weak RIPA Lysis Buffer 置于室温溶解混匀后，加入 PMSF 使终浓度为 1mM。

2. 取在液氮或超低温冰箱中冷冻以上的组织，迅速用液氮研磨，研磨过程尽量控制在

1～2min 之内，以减少蛋白的降解。

3. 按照每 20mg 组织加入 150～250μl 裂解液的比例，加入含有 PMSF 的裂解液。冰上或 4℃裂解 15～30min。

4. 4℃离心（如无低温离心机，室温下离心亦可），取上清。

5. 进行后续的 SDS-PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。

注意事项：

1. 在贴壁培养细胞的操作步骤中，去除贴壁细胞的培养液后，如果血清中的蛋白没有干扰，可以不用清洗。

2. 如果裂解不充分可以适当增加裂解液的用量，如果需要高浓度的蛋白样品，可以适当减少裂解液的用量。

3. 在培养细胞的裂解中，如果细胞量较多，必需分装成 50～100 万细胞/离心管，然后再裂解。

4. 如果组织样品本身非常细小，可以适当剪切后直接加入裂解液裂解，通过强烈震荡使样品裂解充分。

5. 溶解 Lysis Buffer 时，应尽量缩短溶解时间，避免裂解液中的有效成分失效。

6. 细胞裂解的操作步骤，应置于冰上或 4℃进行。

7. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！