动物胞浆蛋白微量制备试剂盒

动物胞浆蛋白微量制备试剂盒

产品及特点
DNA只存在于细胞核内,因此参与转录调节和 DNA复制的蛋白质主要存在于细胞核中，要研究蛋白质与 DNA的相互作用，首先需要制备能够与DNA作用的天然细胞核蛋白质。目前、细胞核蛋白质制备方法一般都比较繁琐，一次处理大量样品时尤其不便，为此本公司开发了本产品，用于从哺乳动物组织和培养细胞核蛋白的微量提取，它具有下列特点:
1.提取制备过程简便，只需要一小时。

2.实验重复性好，尤其适合同时处理多个样品。

3.可用于培养的动物细胞，也可以用于组织细胞。

4.制备的核蛋白能保持天然活性，可以直接用于转录因子活性分析、凝胶阻滞实验(gel shift assay)、免疫共沉淀、Western Blotting、DNA足迹图实验和甲基化干扰实验酶活性测定等研究。

规格及成分

运输及保存 低温运输，4℃保存，有效期一年。

自备试剂 PBS缓冲液，PMSF溶液，DTT溶液
使用方法

1、对贴壁绷胞:将5×1057个细胞培养到覆盖率为55-65%，吸弃培养基，用自备的预冷PBS缓冲液洗涤细胞一次，将细胞从壁上小心刮下，转移到预冷的塑料离心管中，4℃ 300o rpm离心5分钟，小心弃上清。直接进入第三步进行后续处理。
2、对最浮细鹿:直接将5×1057个的悬浮细胞转移到1.5mL预冷的塑料离心管中，4℃ 3000 rpm离心5分钟，用自备的预冷的PBS洗涤细胞沉淀一次，3000 rpm离心5分钟，小心弃上清。直接进入第三步处理细胞沉淀。说明:悬浮细胞制备胞浆的效果一般好于贴壁细胞。
3、在细胞沉淀中加入相当于沉淀细胞体积5倍或更多的预冷的溶液A重悬细胞，一般不超过300 uL-500 uL溶液A。溶液A在临用前最好加入终浓度为0.2mM的PMSF和1mM 的 DTT。PMSF和DTT在水溶液中都不稳定，只能临用提加入。
4、冰浴静置10分钟。

5、将细胞转移到预冷的15mL的 Dounce或Potter玻璃匀浆器中(温和破裂细胞用)，上下匀浆10-15次（为检查效果，可取少量裂解物与自备的0.01%Trypan Blue溶液混合，在显微镜下观察，只有破裂细胞的细胞核才能染色，完整细胞无色。如果需要，可增加匀浆次数直到80-90%以上的细胞裂解为止)。
6、小心转移到预冷的离心管中，4℃ 17000g 离心15分钟，线粒体，细胞核等细胞器将沉淀到管底。保留上清（胞浆部分)待用。

特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！