一站式SDS-PAGE蛋白电泳套装

一站式SDS-PAGE蛋白电泳套装

产品及特点
SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)是目前电泳法变性分离蛋白质的主要方法，但是单独配制各种溶液十分繁琐，为此开发了本产品。它具有下列特点:
1. 一站式，即开即用，用户不需单独准备各种成分，十分方便。
2. 安全，将实验人员接触粉末状丙烯酰胺的可能降到最低。
3. 灵活，分开提供的丙烯酰胺和甲叉双丙烯酰胺便于配制各种比例和浓度的 SDS-PAGE，满足分离各种大小不同的蛋白质的要求。
4. 使用改良的浓缩胶缓冲液，由于其含有染料，制备的浓缩胶呈蓝色，便于上样时识别加样孔。

5. 电泳后可直接用于考染、银染、Western 杂交等实验。

规格及成分

运输及保存 常温运输和保存，但TEMED和5×SDS-PAGE上样液需低温运输，分别在4℃ 和-20℃有效期一年。

自备试剂 去离子水

使用方法

1. 第一次使用本产品时需先配制 30%丙烯酰胺-甲叉双丙烯酰胺（19:1）溶 液(30% AB 溶液，下同):在本产品提供的装有 60 克丙烯酰胺/3g 甲叉双 丙烯酰胺干粉的瓶中加入 146 mL 自备的去离子水，充分摇晃 10-20 分 钟即得 200 mL 30%丙烯酰胺/甲叉双丙烯酰胺（19:1）溶液（以下简称 30%AB 溶液）。丙烯酰胺与甲叉双丙烯酰胺比例在 19:1 时，PAGE 胶的 孔径最小，分辨率最高。配好的 30%ＡＢ溶液最好 4℃避光保存并在１月 内用完。

2. 根据平板的面积和胶的厚度估计需要配制的浓缩胶和分离胶的体积。并根 据要分离的蛋白质的大小确定选择浓缩胶和分离胶的浓度

3. 配制 10%的 APS（过硫酸铵）：称 0.1 克过 APS 干粉到 1 mL 去离子水 中，摇晃溶解。配制好的 10%的 APS 溶液可以在 4℃存放一周。

4. 配制分离胶：在一个 25 mL 的三角瓶中，先按下表的用量加入水、30% 的 AB 溶液和 4×分离胶缓冲液。以下是配制 10 mL 胶的用量，更大体积 则各成分用量需按比例增加。丙烯酰胺溶液有神经毒性，一定要戴手套操 作。

5. 配制浓缩胶（一般使用 4%的浓度）：在一个 25 mL 的三角瓶中，先按下 表的用量加入水、30%ＡＢ溶液和 4×浓缩胶缓冲液。以下是配制 10 mL ４％浓缩胶的用量，丙烯酰胺溶液具有神经毒性，一定要戴手套操作。

6. 将分离胶和浓缩胶溶液摇晃混匀，抽真空 10-15 分钟以去除溶液中的氧气（氧气能抑制丙烯酰胺聚合反应，不去除将影响丙烯酰胺聚合反应）。
7. 分别加入 50 uL 10%APS 和 30-50 uL TEMED（这是配制 10 mL 分离
胶和浓缩胶的用量，更大体积的胶则用量需按比例增加），迅速摇匀。
8. 先灌分离胶，在胶的液面距离顶部 1.5 cm 的时候，停止灌胶。
9. 由于分离胶比重较大，可以立即在上面灌浓缩胶，但灌注时必须小心，不
要破坏分离胶和浓缩胶的液面，在浓缩胶液面达到顶部时停止灌胶，插入
梳子，室温聚合 30-60 分钟。如果不能做到小心灌浓缩胶，则必须待分离
胶室温聚合 30-60 分钟后再灌制。
10. 拔出梳子，用 1×SDS-PAGE 电泳液冲洗加样孔。
11. 将凝胶板固定在电泳装置上，往上槽和下槽加入足够的 1×SDS-PAGE 电泳液。本产品提供 20 升的 SDS-PAGE 电泳液干粉，将所有干粉溶解在 2L 水中即得 10×SDS-PAGE 电泳液（测 pH 应该在 8.3，如果不是 8.3请用 NaOH 或 HCl 调到 8.3），用时再稀释成 1×工作液。
12. 在蛋白质样品中加入5×SDS-PAGE上样液（4uL样品中加1uL上样液），100℃煮沸 3-5 分钟。短暂离心，取上清上样。
13. 先用 10 mA 的电流电泳（对 0.75 mm 厚×14 cm×14 cm 的胶）直到染料进入从浓缩胶进入分离胶。
14. 将电流增加到 15 mA，直到染料进入分离胶底部时终止电泳，取出凝胶进行后续的实验处理。

特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！