维生素B6检测试剂盒微量法 微量法

维生素 B6（VB6）检测试剂盒说明书

微量法

规格：100T/48S

产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致

溶液的配制：

1、 提取液：内含不溶物，使用前摇匀；

2、 试剂四：临用前加入 10 mL 蒸馏水混匀，4℃保存一周，如果一次性用不完，可分装于-20℃保存待用；

3、 标准品：10mg 维生素 B6，临用前加入 1 mL 试剂一，配成 10 mg/mL 的标准液。

产品说明：

维生素 B6（Vitamin B6）又称吡哆素，其包括吡哆醇、吡哆醛及吡哆胺，在体内以磷酸酯的形式存在，是一种水溶性维生素，肉类、全谷类、蔬菜和坚果类中含量较高。在机体中参与多种蛋白质和氨基酸的代谢，对生物体具有极其重要的作用。

VB6 与 4-氨基安替比林在强氧化剂作用下生成稳定的黄色化合物，在 400nm 有特征吸收峰。

技术指标：

最 低检出限：0.0179 mg/mL

线性范围：0.03125-1 mg/mL

注意：实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品：

可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅、微量玻璃比色皿/96 孔板、可调式移液枪、研钵/匀浆器、EP管、冰和蒸馏水。

操作步骤：

一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）

组织：将样本磨碎，按照质量（g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g，加入 0.6mL 提取液）加入提取液，60℃浸提 30min，加蒸馏水 0.4mL，混匀后于 25℃，16000rpm 离心 10min，取上清测定（动物组织及其他蛋白含量较高的样本建议离心 20-30 分钟或反复离心 2-3 次至上清无混浊）。

细胞或细菌：按照细胞数量（10⁴个）：提取液体积（mL）为 500~1000：1 的比例（建议 500 万细胞加入 0.6mL提取液），冰浴超声波破碎细胞（功率 300w，超声 3 秒，间隔 7 秒，总时间 3min）；加蒸馏水 0.4mL，混匀后于 25℃，16000rpm 离心 10min，取上清测定。

液体：直接检测。

二、测定步骤

1. 分光光度计/酶标仪预热 30min 以上，调节波长至 400nm，蒸馏水调零。

2. 将 10mg/mL 标准液用试剂一稀释为 1、0.5、0.25、0.125、0.0625、0.03125、0.015625mg/mL 的标准溶液备用。

3. 操作表：在 1.5mL 离心管或 96 孔板中依次加入下列试剂

三、维生素 B6 含量计算

注意事项：

1、 如果测定吸光值超过线性范围吸光值，可以增加样本量或者稀释样本后再进行测定。

2、 蛋白浓度较高的样本，比如动物组织、豆类种子等，若显色完成后有沉淀产生，将样本稀释后再测定，在计算公式中乘以稀释倍数。

3、 显色完成后立即进行测定，尽量保证反应时间一致。

实验实例：

1、 称取 0.1g 小鼠肌肉组织，加入 0.6mL 提取液，60℃浸提 30min，加蒸馏水 0.4mL，混匀后于 25℃，16000rpm离心 10min，取上清，之后按照测定步骤操作，使用 96 孔板测得计算 ΔA=A 测定管-A 对照管=0.129-0.087=0.042，标准曲线 y=0.834x-0.0104，计算 x=0.0628，按样本质量计算 VB6 含量得：

VB6（mg/g 质量）=x×V 提取÷W= 0.0628×1 ÷0.1=0.628 mg/g 质量。

2、 称取 0.1g 花生，加入 0.6mL 提取液，60℃浸提 30min，加蒸馏水 0.4mL，混匀后于 25℃，16000rpm 离心 10min，取上清，之后按照测定步骤操作，使用 96 孔板测得计算 ΔA=A 测定管-A 对照管=0.256-0.159=0.097，标准曲线 y=0.834x-0.0104，计算 x=0.129，按样本质量计算 VB6 含量得：

VB6（mg/g 质量）=x×V 提取÷W=0.129×1÷0.1=1.29 mg/g 质量。

特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！