土壤淀粉酶检测试剂盒微量法 微量法

土壤淀粉酶（S-AL）活性检测试剂盒说明书

微量法

规格：100T/48S

产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致

溶液的配制：

1、 试剂二：临用前加入 5 mL 蒸馏水，置于常温水中并加热至煮沸，期间不断搅拌或震荡至粉剂溶解。

2、 标准品：10 mg 麦芽糖。临用前加入 1.38 mL 蒸馏水配制成 20 μmol/mL 的储备液。

产品说明：

淀粉酶（EC3.2.1.1）是催化淀粉水解的一类酶的总称。土壤中的淀粉酶主要来自于微生物，是一种重要的酶制剂，广泛应用于粮食加工、食品、酿造、发酵、纺织品工业和医药行业。

淀粉酶水解淀粉产生还原糖，可与3,5-二硝基水杨酸反应生成红棕色物质，在540nm处有特征吸收峰，颜色深浅在一定范围内与还原糖量成正比。

注意：实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品：

天平、水浴锅、低温离心机、可见分光光度计/酶标仪、微量玻璃比色皿/96孔板、30~50目筛、研钵、甲苯（不允许快递）。

操作步骤：

一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）

新鲜土样自然风干或 37℃烘箱风干，过 30~50 目筛。

二、测定步骤

1. 分光光度计/酶标仪预热30min，波长调至540nm，蒸馏水调零。

2. 将20μmol/mL的麦芽糖储备液用蒸馏水稀释为2、1、0.8、0.6、0.4μmol/mL的标准溶液备用。

3. 步骤：

三、土壤淀粉酶活力的计算

1、标准曲线的绘制：

以标准溶液的浓度为x轴，ΔA标准为y轴绘制标准曲线，得到标准方程y=kx+b。将ΔA测定带入方程得到x（μmol/mL）。

2、酶活的计算：

单位的定义：每天每g土样产生1μmol还原糖定义为一个土壤淀粉酶活力。

S-AL（U/g 土样）=x×V反总÷W÷T=0.21×x÷W

V反总：酶促反应总体积，0.21mL；W：土样质量，g；T：反应时间，1d。

注意事项：

1、 当 ΔA 大于 1.5 时，建议将上清液稀释后再进行测定，注意在计算公式中乘以稀释倍数。

2、 若 ΔA 测定较小，增加反应的上清液体积或适当增加酶促反应时间，计算酶活时对公式进行修改。

3、 建议每次实验煮沸后的冷却时间保持一致，吸光值请于 30min 内测定完成。

实验实例：

1、 取 0.05g 土样于 1.5mLEP 管中，依次加入 10μL 甲苯、100μL 试剂一、100μL 试剂二为测定管；取 0.05g 土样于 1.5mLEP 管中，依次加入 10μL 甲苯、100μL 试剂一、100μL 蒸馏水为对照管，均放于 37℃培养 24h，后离心取上清再液稀释 3 倍，之后按照测定步骤操作，用 96孔板测得计算 ΔA=A 测定管-A 对照管=0.948-0.12=0.828，标准曲线：y=0.7604x-0.158，x=1.297，按土样质量计算酶活得：

S-AL（U/g 土样）=0.21×x÷W×3（稀释倍数）=0.21×1.297÷0.05×3（稀释倍数）=16.34 U/g 土样。

特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！