总果胶含量检测试剂盒说明书
微量法
规格:100T/48S
产品组成:使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致
![image 2022060902181428051](https://shzbio.net/upload/ueditor/image/20220609/2022060902181428051.png)
溶液的配制:
1、 试剂一:自备浓硫酸。
2、 标准品:10 mg 半乳糖醛酸,临用前加入 0.943 mL 提取液二,配成 50 μmol/mL 的标准液。
产品说明:
果胶是植物细胞壁主要组成成分之一,分为水溶性果胶和不溶性果胶(原果胶或碱溶性果胶)。果胶是一种天然高分子化合物,具有良好的胶凝化和乳化稳定作用,已广泛用于食品、医药、日化及纺织行业。原果胶在稀酸中水解为可溶性果胶,与原有的可溶性果胶进一步转化为半乳糖醛酸,产物在强酸中与咔唑缩合生成紫红色化合物,在530nm处有特征吸收峰。
技术指标:
最 低检出限:0.096 μmol/mL
线性范围:0.25-4 μmol/mL
注意:实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品:
可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅、浓硫酸、微量玻璃比色皿/96孔板、可调式移液枪、研钵/匀浆器和蒸馏水。
操作步骤:
一、样本处理(可适当调整待测样本量,具体比例可以参考文献)
将组织样本捣碎,按照样本质量(g)和提取液一体积(mL)为 1: 20 的比列(建议取约 0.05g 样本,加入 1mL 提取液一),置于 90℃恒温水浴锅中浸提 30min,取出冷却后于 5000g、25℃离心 10min,去掉上清,沉淀中再加入 1mL提取液一重复操作一次,离心后去上清,沉淀中加入 1mL 提取液二,置于 90℃恒温水浴锅中水解 1h,取出冷却后于 8000g、25℃离心 15min,取上清液待测。
二、测定步骤
1. 分光光度计/酶标仪预热30min以上,调节波长至530nm,蒸馏水调零。
2. 标准品的制备:将50μmol/mL标准液用提取液二稀释3、2.5、2、1.5、1、0.5μmol/mL的标准溶液备用。
3. 操作表:
![image 2022060902180533956](https://shzbio.net/upload/ueditor/image/20220609/2022060902180533956.png)
三、总果胶含量的计算
1. 标准曲线的绘制:
以各个标准溶液的浓度为x轴,其对应的ΔA标准为y轴,绘制标准曲线,得到标准方程y=kx+b,将ΔA测定带入方程得到x(μmol/mL)。
2. 总果胶含量的计算:
总果胶含量(μmol/g 质量)=x×V提取液二÷W=x÷W
V提取液二:加入提取液二的体积,1mL;W:样本质量,g。
注意事项:
1.浓硫酸具有强腐蚀性,操作时需特别注意,90℃加热、冷却后再打开盖子,以防液体飞溅烧伤。
2.如果测定吸光值超过线性范围吸光值,可以增加样本量或者稀释样本后再进行测定。
实验实例:
1、 取 0.05g 苹果果肉进行样本处理,取上清液 5 倍稀释后按照测定步骤操作,使用 96 孔板测得计算 ΔA 测定管=A测定管-A 对照管=0.25-0.074=0.176,依据标准曲线 y=0.5149x-0.1393,计算 x=0.612,按样本质量计算:
总果胶含量(μmol/g 质量)=x×5(稀释倍数)÷W=61.2 μmol /g 质量。
特别提示:本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!
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