中性转化酶（NI）活性检测试剂盒 可见分光光度法

中性转化酶（NI）活性检测试剂盒说明书

可见分光光度法

规格：50T/24S

产品内容：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致

溶液的配制：

1．试剂二：临用前加入 30mL 试剂一充分溶解备用；用不完的试剂 4℃保存；

2．标准品：10mg 葡萄糖，临用前加入 1mL 蒸馏水溶解，制备 10mg/mL 葡萄糖标准液备用。

产品说明：

蔗糖转化酶（Invertase，Ivr）催化蔗糖不可逆地分解为果糖和葡萄糖，是高等植物蔗糖代谢关键酶之一。根据最适 pH，将高等植物 Ivr 分为酸性转化酶（AI）和中性转化酶（NI）两种类型。NI 主要存在于细胞质中，负责分解细胞质中蔗糖为果糖和葡萄糖。

NI 催化蔗糖分解产生还原糖，进一步与 3,5－二硝基水杨酸反应，生成棕红色氨基化合物，在 540nm 有特征光吸收，在一定范围内 540nm 光吸收值与还原糖生成量成正比。通过光吸收增加速率来计算 NI 活性。

注意：实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品：

可见分光光度计、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、1 mL玻璃比色皿、研钵/匀浆器、冰、蒸馏水。

操作步骤：

一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）

按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL提取液），进行冰浴匀浆。12000g ，4℃离心10min，取上清，置冰上待测。

二、测定步骤

1、分光光度计预热30min，调节波长至540mm，蒸馏水调零。

2、标准品的制备：将标准品用蒸馏水稀释成1.0、0.8、0.6、 0.4、0.2、0mg/mL葡萄糖标准液，

4、操作表（在1.5mL EP管中依次加入下列试剂）

混匀，煮沸 10min 左右（盖紧，以防止水分流失），流水冷却后充分混匀，540nm 处蒸馏水调零，记录各管吸光值 A，ΔA=A 测定-A 对照。

三、NI 活性计算

注意事项：

1、如果加入试剂三，煮沸 10min 后有混浊物出现，建议离心除去沉淀后，取上清测定吸光度。

2、如果吸光值大于 1，可以用蒸馏水将样本稀释后测定（计算公式中乘以相应稀释倍数）。

3、由于提取液中含有一定浓度的蛋白（约 1mg/mL），所以在测定样本蛋白浓度时需要减去提取液本身的蛋白含量。

实验实例：

1、 取 0.1g 冬青加入 1mL 提取液进行匀浆研磨，取上清后按照步骤操作，测得计算 A 测定=0.778，A 对照=0.774，ΔA=A 测 定 -A 对 照 =0.778-0.774=0.004， 带 入 标 准 曲 线 y = 0.9582x - 0.123， 计 算 x=（ 0.004+0.123）/0.9582=0.13254，按样本质量计算酶活得：

NI 活性（U/g 质量）=33.3 ×x÷W =33.3 ×0.13254÷0.1=44.136 U/g 质量。

特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！