大肠杆菌膜蛋白提取试剂盒

产品概述

大肠杆菌膜蛋白提取试剂盒是一种高效的高产膜蛋白提取试剂盒。大肠杆菌膜蛋白提取试剂盒可以从各种大肠杆菌菌体中提取膜蛋白，可用于纯化蛋白的粗品制备及膜蛋白制备。提取过程简单方便。该试剂盒含有蛋白酶抑制剂混合物，阻止了蛋白酶对蛋白的降解，为提取高质量的蛋白提供了保证。 本试剂盒提取的蛋白可用于Western Blotting、蛋白质电泳、免疫沉淀、ELISA、转录活性分析、Gel shift凝胶阻滞实验、酶活性测定等下游蛋白研究实验。 本试剂盒提取的蛋白为具有天然蛋白构象的活性蛋白，下游应用范围广，提取液裂解细胞的能力较温和，需要根据实际样本情况优化裂解时间。 本试剂盒中不含有EDTA，与金属螯和层析等下游应用兼容。

保存温度

2-8℃

注意事项

1.蛋白酶抑制剂未开盖使用前也可以2-8℃储存。开盖使用后-20℃储存。

2.蛋白酶抑制剂在2-8℃低温时是固体状态，从冰箱取出后恢复至室温或37℃短时间水浴，变成液体状态后离心至管底部再开盖。

3.试剂拆封后请尽快使用完！

有效期

一年

检测方法

WB,IP等

适用样本

大肠杆菌

产品特点

1.使用方便，从大肠杆菌中提取蛋白不需经过超声破碎等前处理。

2.将蛋白提取的时间缩短至30分钟-1小时。

3.含蛋白稳定剂，提取的蛋白稳定。

4.紫外检测蛋白浓度时，背景干扰低。

5.蛋白酶抑制剂抑制了蛋白的降解，蛋白酶抑制剂配方优化。蛋白酶抑制剂混合物包含6种独立的蛋白酶抑制剂；每一种抑制剂可特异性抑制某一种或几种蛋白酶活性。该混合物优化的组成使其可以抑制几乎所有重要的蛋白酶活性，包括丝氨酸蛋白酶、半胱氨酸酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、丙氨酰-氨基肽酶等。

6.本品不含EDTA，可以用于金属螯合层析等下游应用。

产品应用

WB,IP等

仪器准备

1.离心机

2.振荡器

3.涡旋混匀器

4.移液器

5.冰箱

6.冰盒

试剂准备

1.PBS缓冲液

2.蛋白定量试剂盒

耗材准备

1.离心管

2.吸头

3.一次性手套

使用注意事项：

? 旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体甩至管底，避免开盖时液体洒落。

? 实验过程中的所有试剂须预冷；所有器具须放-20℃冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。

? 蛋白酶抑制剂储存期间溶液如果出现沉淀，不影响使用，溶解后正常使用。

? 蛋白酶抑制剂在2-8℃时是固体状态，从冰箱取出后恢复至室温或37℃短时间水浴，变成液体状态后离心至管底部再开盖。

? 提取液A在使用前须一直置于2-8℃条件，否则下游膜蛋白提取时会导致不容易分层。

? 可以根据自己实验需要加入其它蛋白酶抑制剂单品。

使用方法

1. 提取液制备：

每500 μl冷的提取液A中加入5 μl提取液B 和2 μl蛋白酶抑制剂混合物，充分混匀后置冰上备用。

2. 离心收集菌体，用PBS洗菌体2次。

3. 按每100-150 mg湿重菌体样本加入500 μl冷的提取液A（大约菌体和提取液体积比1:3-1:5，完全淹没菌体即可），吹打混匀，在2-8℃振荡1-2小时，至菌体裂解完全，菌体沉淀减少。

4. 将菌体提取液在2-8℃低温下12000×g离心5分钟，弃沉淀，取上清。

5. 将上清液在37℃水浴10分钟。

6. 在37℃， 1000×g离心3分钟。

7. 此时液体分为2层，小心移除上层溶液，留管底部下层，大约50μl液体。

8. 用50-200 μl冷的膜蛋白溶解液溶解该下层部分，即得大肠杆菌膜蛋白样品。

9. 将上述蛋白提取物定量后分装于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验。

特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！